Co je to buněčná linie?

Buněčná linie je taková, kdy je určitý typ buněk trvale kultivován in vitro, aby neustále produkoval buňky, pokud mají k dispozici čerstvé médium, na kterém mohou růst.

Obrázek Credits: Jens Goepfert / .com

Buněčná linie se liší od běžné buněčné kultury, protože buňky v buněčné linii byly imortalizovány. Imortalizace buněk spočívá v tom, že buňky v buněčné linii jsou zmutovány tak, aby se neustále dělily a nedosáhly určité hranice růstu. Naproti tomu buňky v primární buněčné kultuře jsou odebírány přímo z tkáně a mají stanovenou dobu života.

Výhody buněčné linie ve srovnání s primární buněčnou kulturou:

• Zajišťuje neomezený přísun buněčného materiálu pro studium
• Vždy produkuje stejně čisté buňky, takže výsledky jsou reprodukovatelné
• Nákladově efektivní
• Snadná údržba

Proč potřebujeme buněčné linie?

Založení buněčné linie je v rámci výzkumu buněčné a molekulární biologie velmi běžnou praxí. Tyto buňky lze použít ke studiu mnoha různých oblastí buněčného metabolismu a funkce genů, stejně jako je lze použít k výrobě vakcín, protilátek a některých léčiv.

Různé buněčné linie se používají pro specifické účely. Například buněčné linie HeLa se běžně používají ke studiu rakoviny, buňky lidských embryonálních ledvin (HEK) se často používají ke studiu genové exprese a buňky vaječníků čínských křečků (CHO) se často používají ke genetickému inženýrství nebo k syntéze specifických produktů.

Co mohou nabídnout buněčné linie označené reportérem?

Buněčné linie označené reportérem, nazývané také jednoduše reportérové buněčné linie, nabízejí ve srovnání s normální buněčnou linií různé aplikace. Lze je použít k vizualizaci a sledování exprese proteinů, transkripčních faktorů nebo jiných molekul a také k potenciálnímu sledování jejich polohy v rámci celých buněk v reálném čase. To umožňuje výzkumníkům zajistit, aby jejich buněčné linie přesně reprezentovaly normální metabolické změny, ke kterým dochází v přirozených tkáních, a co je důležitější, mohou určit, které geny jsou v buňce aktivně exprimovány.

Jak fungují buněčné linie s reportérovým značením?

Nejčastějším cílem reportérové buněčné linie je měření exprese určitých genů nebo produkce určitých proteinů. To se provádí zavedením reportérových genů do buněčné linie.

Jako reportérové geny lze použít různé geny, které se obvykle vybírají podle míry měřitelné aktivity. Často se například používá gen pro luciferázu nebo GFP (zelený fluorescenční protein), protože oba produkované proteiny lze spustit tak, aby vytvářely měřitelnou fluorescenci. Tuto fluorescenci lze měřit buď luminometrem, nebo spektrofotometrem.

Zvolený reportérový gen se vloží do vektoru vedle specifického promotoru zkoumaného genu a použitá buněčná linie se tímto vektorem transfekuje. Pokud je promotor v buněčné linii aktivně exprimován, pak dojde k expresi reportérového genu, kterou lze měřit.

Jak lze tento systém využít?

Tento systém je založen především na měření, zda jsou konkrétní promotory exprimovány, ale lze jej použít k měření aktivity různých biochemických drah, které mají následné signály končící transkripcí genů. Určení, zda jsou určité geny exprimovány, může také určit, zda byla buněčná linie infikována virem, nebo naznačit rozvoj rakoviny.

Tento systém je proto velmi užitečný při studiu různých onemocnění, protože poskytuje snadno interpretovatelné výsledky toho, jak jsou různé geny exprimovány za různých podmínek.

Další čtení

• Všechen obsah značení buněk
• Přehled značení nukleových kyselin
• Bioortogonální chemické reportéry
• Adipo-Clear
• Značení DNA pomocí DAPI: DAPI: metodika

Citace

.