Biomolekulární interakce jsou zásadní pro většinu buněčných procesů a identifikace hlavních interagujících složek je obvykle prvním krokem k pochopení mechanismů, které řídí různé buněčné funkce. Statistické analýzy obrazu, které lze provádět na snímcích z fluorescenční mikroskopie fixovaných nebo živých buněk, se proto běžně používají pro biofyzikální a buněčně biologické studie. Tyto přístupy měří podíl interagujících částic analýzou dvoubarevných fluorescenčních snímků pro kolokalizované pixely. Kolokalizační algoritmy se ukázaly jako účinné, ačkoli dynamický rozsah a přesnost těchto měření nebyly nikdy dobře stanoveny. Prostorová obrazová křížová korelační spektroskopie (ICCS), která křížově koreluje prostorové fluktuace intenzity zaznamenané v obrazech ze dvou detekčních kanálů současně, se nedávno rovněž ukázala jako účinné měření kolokalizace. Prostřednictvím simulací, zobrazování fluorescenčních protilátek adsorbovaných na skle a měření na buňkách ukazujeme, že ICCS funguje mnohem lépe než standardní kolokalizační algoritmy při středních až vysokých hustotách částic, které se často vyskytují v buněčných systémech. Dále bylo zjištěno, že poměr hustoty mezi dvěma označenými druhy, které nás zajímají, hraje hlavní roli v přesnosti kolokalizační analýzy. Použitím přímého a systematického srovnání standardního, fluorescenčního mikroskopického kolokalizačního algoritmu a prostorové ICCS jsme ukázali režimy, ve kterých je každý z přístupů použitelný, a co je důležitější, ve kterých nepřinášejí přesné výsledky.

.

Napsat komentář

Vaše e-mailová adresa nebude zveřejněna.