Nefelometrie je technika používaná v imunologii ke stanovení hladin několika proteinů krevní plazmy. Například celkové hladiny izotypů nebo tříd protilátek: Imunoglobulin M, Imunoglobulin G a Imunoglobulin A. Je důležitá při kvantifikaci volných lehkých řetězců u onemocnění, jako je mnohočetný myelom. Kvantifikace je důležitá pro klasifikaci onemocnění a pro sledování onemocnění poté, co byl pacient léčen (zvýšené zkreslení poměru mezi lehkými řetězci kappa a lambda po léčbě pacienta je známkou recidivy onemocnění).

Provádí se měřením rozptýleného světla pod úhlem od měřeného vzorku. Při diagnostické nefelometrii se vzestupná větev Heidelbergerovy-Kendallovy křivky prodlužuje optimalizací průběhu reakce tak, aby signály měření většiny plazmatických bílkovin (z lidské krve) spadaly na levou stranu Heidelbergerovy-Kendallovy křivky, a to i při velmi vysokých koncentracích.

Tato technika se široce používá v klinických laboratořích, protože je poměrně snadno automatizovatelná. Je založena na principu, že zředěná suspenze malých částic rozptyluje světlo (obvykle laser), které jí prochází, místo aby ho jednoduše absorbovala. Velikost rozptylu se určuje sběrem světla pod úhlem (obvykle 30 a 90 stupňů).

Protilátka a antigen se smíchají v takové koncentraci, aby se vytvořily pouze malé agregáty, které se rychle neusadí na dně. Změří se množství rozptylu světla a porovná se s množstvím rozptylu ze známých směsí. Množství neznámé látky se určí ze standardní křivky.

Nefelometrii lze použít k detekci antigenu nebo protilátky, ale obvykle se provádí s protilátkou jako činidlem a pacientovým antigenem jako neznámou. V imunologické lékařské laboratoři lze provádět dva typy testů: „koncovou nefelometrii“ a „kinetickou (rychlostní) nefelometrii“.

Testy nefelometrie v koncovém bodě se provádějí tak, že se reakce protilátka/antigen nechá proběhnout až do konce (dokud se všechny přítomné protilátky činidla a přítomné antigeny vzorku pacienta, které se mohou shlukovat, neshlukují a nemohou se vytvořit žádné další komplexy). Velké částice však vypadnou z roztoku a způsobí falešný údaj o rozptylu, proto byla vymyšlena kinetická nefelometrie.

Při kinetické nefelometrii se měří rychlost rozptylu hned po přidání činidla. Dokud je činidlo konstantní, lze rychlost změny považovat za přímo závislou na množství přítomného antigenu.

Napsat komentář

Vaše e-mailová adresa nebude zveřejněna.