Mikrosomy jsou v buněčné biologii heterogenní vezikulární artefakty (o průměru ~20-200 nm), které se znovu tvoří z částí endoplazmatického retikula (ER) při rozpadu eukaryotických buněk v laboratoři; mikrosomy nejsou přítomny ve zdravých, živých buňkách.

Mikrosomy lze koncentrovat a oddělit od ostatních buněčných zbytků diferenciální centrifugací. Nerozbité buňky, jádra a mitochondrie sedimentují při 10 000 g, zatímco rozpustné enzymy a fragmentované ER, které obsahují cytochrom P450 (CYP), zůstávají v roztoku (g je gravitační zrychlení Země). Při 100 000 g, kterých se dosáhne rychlejší rotací centrifugy, ER sedimentuje z roztoku jako peleta, ale rozpustné enzymy zůstávají v supernatantu. Tímto způsobem se koncentruje a izoluje cytochrom P450 v mikrosomech. Mikrosomy mají červenohnědou barvu díky přítomnosti hemu. Vzhledem k potřebě vícedílného proteinového systému jsou mikrosomy nezbytné k analýze metabolické aktivity CYP. Tyto CYP jsou velmi hojně zastoupeny v játrech potkanů, myší a lidí, ale jsou přítomny i ve všech ostatních orgánech a organismech.

Pro získání mikrosomů obsahujících specifický CYP nebo pro vysoké množství aktivního enzymu se mikrosomy připravují z hmyzích buněk Sf9 nebo v kvasinkách pomocí heterologní exprese. Alternativně lze také provést expresi celých nebo zkrácených proteinů v Escherichia coli. Mikrosomy jsou proto cenným nástrojem pro zkoumání metabolismu sloučenin (inhibice enzymů, clearance a identifikace metabolitů) a pro zkoumání interakcí mezi léčivy pomocí in vitro výzkumu. Výzkumníci často vybírají partie mikrosomů na základě úrovně enzymové aktivity specifických CYP. Některé šarže jsou k dispozici pro studium specifických populací (například: plicní mikrosomy od kuřáků nebo nekuřáků) nebo jsou rozděleny do klasifikací, aby splňovaly cílové úrovně aktivity CYP pro studie inhibice a metabolismu.

Výzkumníci používají mikrosomy k napodobení aktivity endoplazmatického retikula ve zkumavce a k provádění experimentů, které vyžadují syntézu proteinů na membráně; poskytují vědcům způsob, jak zjistit, jak se proteiny tvoří na ER v buňce tím, že tento proces rekonstruují ve zkumavce.

.

Napsat komentář

Vaše e-mailová adresa nebude zveřejněna.