Typy imunofluorescence

Existují dvě třídy imunofluorescenčních technik, primární (neboli přímá) a sekundární (neboli nepřímá).

Primární (přímá)

Primární neboli přímá imunofluorescence používá jednu protilátku, která je chemicky spojena s fluoroforem. Protilátka rozpozná cílovou molekulu, naváže se na ni a fluorofor, který nese, lze detekovat pomocí mikroskopie. Tato technika má oproti níže uvedenému sekundárnímu (nebo nepřímému) protokolu několik výhod díky přímé konjugaci protilátky s fluoroforem. Tím se snižuje počet kroků v postupu barvení, což urychluje proces a může snížit signál pozadí tím, že se předejde některým problémům s křížovou reaktivitou nebo nespecifičností protilátek. Protože je však počet fluorescenčních molekul, které lze navázat na primární protilátku, omezený, je přímá imunofluorescence méně citlivá než nepřímá imunofluorescence.

Sekundární (nepřímá)

Sekundární neboli nepřímá imunofluorescence používá dvě protilátky; neznačená první (primární) protilátka specificky váže cílovou molekulu a sekundární protilátka, která nese fluorofor, rozpozná primární protilátku a naváže se na ni. Na jednu primární protilátku se může vázat více sekundárních protilátek. To umožňuje zesílení signálu zvýšením počtu molekul fluoroforu na antigen. Tento protokol je složitější a časově náročnější než výše uvedený primární (nebo přímý) protokol, ale umožňuje větší flexibilitu, protože pro danou primární protilátku lze použít různé sekundární protilátky a detekční techniky.

.