Genotoxicita označuje schopnost látky poškodit genetickou informaci buněk (změny struktury, sekvence a/nebo počtu genů), což může mít přímé nebo nepřímé účinky, jako je vyvolání mutací, aktivace nebo inaktivace genů. K opravě nebo kontrole poškození se obvykle aktivují cesty opravy DNA nebo apoptózy; pokud je však poškození fixováno, může dojít k mutagenezi a dokonce k rakovině. Mnohdy jsou změny trvalé a dědičné, mohou tedy postihnout jak somatické, tak zárodečné buňky, které se přenesou na další generace. Z definice je zřejmé, že všechny mutageny mají genotoxicitu, ale genotoxické sloučeniny nemusí být nutně mutagenní. Genotoxicita ovlivňuje zdraví pacientů, a dokonce i jejich dětí, a je tedy důležitým aspektem, který je třeba vzít v úvahu při schvalování IND. A co víc, testy genotoxicity jsou také běžnými testy in vitro k předpovědi karcinogenity. Společnost Creative Biolabs vyvinula různé přístupy pro odhad genotoxicity kandidátů na léčiva a pomáhá zákazníkům shromažďovat informace pro IND-enabling.

Cílem testů genotoxicity je určit, zda kandidát na léčivo poškodí genetický materiál v buňkách a způsobí rakovinu. Při těchto testech se po expozici sloučenině měří poškození DNA (např. bodové mutace, přerušení řetězce, zesíťování, strukturální a/nebo numerické chromozomální aberace a ztráta excizní opravy) v buňkách. Existuje řada testů genotoxicity, které lze provádět na bakteriálních, kvasinkových a savčích buňkách. Amesův test a test reverzní mutace Escherichia coli jsou dvě metody testů mutagenity in vitro založené na bakteriálních buňkách, zatímco test chromozomových aberací savců a test genových mutací savčích buněk jsou založeny na savčích buňkách. Amesův test a Cometův test jsou dvě nejoblíbenější metody používané k hodnocení potenciálu chemických látek způsobovat poškození DNA a rakovinu.

Amesův test (bakteriální test reverzní mutace)

Amesův test využívá auxotrofní mutantní kmeny bakterií, které pro svůj růst vyžadují histidin z prostředí. V Amesově testu, pokud je testovaná látka schopna vytvářet mutace (genotoxické), které vedou k prototrofnímu stavu kmenů, by měly mít buňky normální růst na médiu bez histidinu.

Obrázek 1. Amesův test.

Cometův test (Single Cell Gel Electrophoresis Assay)

Cometův test je jedním z nejběžnějších testů genotoxicity. Buňky jsou lyzovány detergenty a solemi a uvolněná DNA prochází elektroforézou v agarózovém gelu za podmínek téměř neutrálního pH. Čím více dvouřetězcových zlomů buňka obsahuje, tím rychleji DNA migruje směrem k anodě. Tato technika je poměrně citlivá pro detekci poškození DNA, snadno a levně se provádí a výsledky testu se získávají rychle.

Při určování genotoxicity sloučenin se používají také další toxikologické testy in vitro a in vivo, jako je test TK+/- myšího lymfomu, test SOS/umu a mikrojádrový test in vitro a in vivo.

Creative Biolabs poskytuje také další služby v oblasti objevování léčiv. Pro podrobnější informace nás neváhejte kontaktovat nebo nám přímo zašlete dotaz.

Pouze pro laboratorní výzkumné účely.

.