Wat is een cellijn?

Een cellijn is een kweek waarbij een bepaald celtype permanent in vitro wordt gekweekt om voortdurend cellen te produceren, zolang ze verse media krijgen om op te groeien.

Image Credits: Jens Goepfert / .com

Een cellijn verschilt van een normale celkweek omdat de cellen in een cellijn zijn geïmmortaliseerd. Bij celimmortalisatie worden de cellen in een cellijn zodanig gemuteerd dat zij zich voortdurend delen en een bepaalde grens in hun groei niet bereiken. Cellen in een primaire celcultuur daarentegen worden rechtstreeks uit weefsel genomen en hebben een vaste levensduur.

Voordelen van een cellijn ten opzichte van primaire celkweek:

• Zorgen voor een onbeperkte voorraad celmateriaal voor studie
• Produceren altijd dezelfde zuiverheid van cellen, zodat de resultaten reproduceerbaar zijn
• Kosteffectief
• Gemakkelijk te onderhouden

Waarom hebben we cellijnen nodig?

Het opzetten van een cellijn is een zeer gebruikelijke praktijk binnen het cellulaire en moleculaire biologie-onderzoek. Deze cellen kunnen worden gebruikt om een groot aantal verschillende gebieden van het cellulaire metabolisme en de genfunctie te bestuderen, maar ook om vaccins, antilichamen en bepaalde geneesmiddelen te vervaardigen.

Verschillende cellijnen worden voor specifieke doeleinden gebruikt. Bijvoorbeeld, HeLa cellijnen worden vaak gebruikt om kanker te bestuderen, Human Embryonic Kidney (HEK) cellen worden vaak gebruikt om genexpressie te bestuderen, en Chinese Hamster Ovarian (CHO) cellen worden vaak gebruikt voor genetische manipulatie of voor de synthese van specifieke producten.

Wat kan reporter-gelabelde cellijnen bieden?

Reporter-gelabelde cellijnen, ook wel eenvoudigweg reporter cellijnen genoemd, bieden verschillende toepassingen in vergelijking met een normale cellijn. Ze kunnen worden gebruikt om de expressie van eiwitten, transcriptiefactoren of andere moleculen te visualiseren en te volgen, en mogelijk ook om in realtime te volgen waar ze zich binnen hele cellen bevinden. Dit stelt onderzoekers in staat om ervoor te zorgen dat hun cellijnen nauwkeurig de normale metabolische veranderingen die zich voordoen binnen natuurlijke weefsels en nog belangrijker kan bepalen welke genen actief worden uitgedrukt binnen een cel.

Hoe reporter-labeled cellijnen werken?

Het meest voorkomende doel van een reporter cellijn is het meten van de expressie van bepaalde genen, of voor de productie van bepaalde eiwitten. Dit wordt gedaan door de introductie van reportergenen in een cellijn.

Verschillende genen kunnen worden gebruikt als reportergenen, en worden gewoonlijk gekozen op basis van de mate van meetbare activiteit. Zo wordt bijvoorbeeld vaak het gen voor luciferase of GFP (groen fluorescerend eiwit) gebruikt, aangezien beide geproduceerde eiwitten kunnen worden aangezet tot het produceren van meetbare fluorescentie. Deze fluorescentie kan worden gemeten met een luminometer of een spectrofotometer.

Het gekozen reportergen wordt in een vector ingebracht, naast een specifieke genpromotor die wordt bestudeerd, en de te gebruiken cellijn wordt vervolgens met deze vector getransfecteerd. Als de promotor actief tot expressie komt in de cellijn, dan zal het reportergen tot expressie komen, hetgeen kan worden gemeten.

Hoe kan dit systeem worden gebruikt?

Dit systeem is hoofdzakelijk gebaseerd op het meten of specifieke promotors tot expressie komen, maar dit kan worden gebruikt om de activiteit te meten van verschillende biochemische routes die stroomafwaartse signalen hebben die eindigen met de transcriptie van genen. Door te bepalen of bepaalde genen tot expressie komen, kan ook worden vastgesteld of een cellijn met een virus is geïnfecteerd, of kan de ontwikkeling van kanker worden gesuggereerd.

Dit systeem is daarom zeer nuttig bij de bestudering van verschillende ziekten, omdat het gemakkelijk interpreteerbare resultaten oplevert over hoe verschillende genen onder verschillende omstandigheden tot expressie komen.

Verder lezen

• All Cell Labeling Content
• Nucleic Acid Labelling Overview
• Bioorthogonal Chemical Reporters
• Adipo-Clear
• DNA Labeling Using DAPI: Methodology

Citaties