Dit overzicht bespreekt nieuwe ontwikkelingen in Förster resonantie energie overdracht (FRET) microscopie en de toepassing ervan op cellulaire receptoren. De methode is gebaseerd op de kinetische theorie van FRET, die kan worden gebruikt om FRET te voorspellen, niet alleen in dimeren, maar ook hogere orde oligomeren van donor en acceptor fluoroforen. Modellen op basis van dergelijke FRET-voorspellingen kunnen worden afgestemd op waargenomen histogrammen van de FRET-efficiëntie (ook FRET-spectrogrammen genoemd) en worden gebruikt om intracellulaire bindingsconstanten, waarden van de vrije energie en stoichiometrieën te schatten. Deze “FRET spectrometrie” methoden zijn gebruikt voor het analyseren van oligomeren gevormd door verschillende receptoren in cel signaalwegen, maar tot voor kort dergelijke studies waren beperkt tot receptoren die zich op het celoppervlak. Om complexen in de cel te bestuderen, werd een techniek ontwikkeld die Quantitative Micro-Spectroscopic Imaging (Q-MSI) wordt genoemd. Q-MSI combineert de bepaling van de quaternaire structuur van schijnbare FRET-spectrogrammen op pixelniveau met de bepaling van zowel donor- als acceptorconcentraties op het niveau van de organellen. Dit wordt gedaan door het spectrum van een derde fluorescerende marker, die niet deelneemt aan FRET, op te lossen en te analyseren. Q-MSI werd voor het eerst gebruikt om de interactie te bestuderen van een klasse van cytoplasmatische receptoren die viraal RNA binden en een antivirale reactie signaleren via complexen die voornamelijk op mitochondriale membranen worden gevormd. Q-MSI onthulde voorheen onbekende oriëntaties van RNA-mitochondriale receptoren, en de interactie tussen de virale RNA-receptor LGP2 en het RNA helicase dat door het hepatitisvirus wordt gecodeerd. Het biologische belang van deze nieuwe waarnemingen wordt besproken.

Geef een antwoord

Het e-mailadres wordt niet gepubliceerd.