Charles Vは、オーストリアから生前のマルグレットに送ったポルトガルのイザベラの肖像画を、もう一つ見つけなければならなくなったのです。 彼の姉は11月に肖像画を送り、シャルルはそれが妻のためのものでないことに非常に失望した。

ティツィアーノは1545年にイザベラの肖像画を描き、ティツィアーノはそれを調度品として、シャルル夫人は黒いドレスを着て、膝には花、後ろには立派な冠を持っていた。 EI Pardo宮殿でこの美術品は火事で焼失し、この話は版画やいくつかのコピーに残されている。 肖像画は鼻が失われていたため、シャルルがアウクスブルクに持ち帰り、画家に鼻を描き直させた。 1548年9月、画家は古いモデルを使って現在のモデルを作り、これもアウクスブルクで描かれた。 シャルルとイザベラは、マドリッドのカサ・デ・アルバ財団のコレクションに一緒に描かれた肖像画と複製があり、これはポルトガルのイザベラとシャルル5世の最初の組み合わせで、最高のものだった。

ティツィアーノの芸術はポルトガルのイザベラを思い出させ、二人を描いたものはシャルルの妻を思い出させた。 シャルルは芸術を求め、正確な絵画を求めるのではなく、自分の心にあるものを視覚化することを望んでいた。 シャルルはティツィアーノに失われた鼻の肖像画を描かせ、彼は鼻が見えるように描くことができたのです。 イザベラ・ポルトガルの肖像画は、鼻筋が通っているのが特徴で、多くの人が注目していた。 ティツィアーノは、ポルトガルのイザベラのような曲線的な鼻に修正する必要があったのだ。 肖像画の中の小さなことがイザベラの思い出となり、シャルルは芸術を身近に感じるようになり、このことはユーステとブリュッセルのような文書に残されている（後者は1556年、前者は1558年に記録されている）

ティツィアーノの作った肖像はジュリオ・ロマーノのものと近いものだった。 ティツィアーノは、ウルビーノ公爵夫人エレオノーラ・ゴンザーガに注目し、その技術を活かしてイザベラの肖像画を制作している。 ポルトガルのイザベラのイメージは、現実のものではなく、記憶を呼び起こすためのものであるため、どこか挑戦的であった。 ポルトガルのイザベラの肖像画は、ティツィアーノによって行われた素晴らしい仕事でしたが、よく見ると、使用されたキャンバスは、以前は女性の芸術であったことがわかりました。 ポルトガルのイザベラが描かれたキャンバスは、2代目フィリップの妹マリアに贈られたものである。 デスカルサス・レアレスという修道院のためのものだった。 1636年にマドリードのアルカサルに運ばれ、1734年に火災に遭うまで、同じ年数そこにあった。