免疫蛍光法の種類

免疫蛍光法には、一次（直接）法と二次（間接）法がある。

一次（直接）法

一次、つまり直接免疫蛍光法は蛍光体に化学結合した単一の抗体を用いる。 抗体は標的分子を認識して結合し、その蛍光色素を顕微鏡で検出することができる。 この手法は、抗体と蛍光色素を直接結合させるため、下記の二次（または間接）プロトコルに比べていくつかの利点がある。 これにより、染色手順のステップ数が減り、プロセスが高速化され、抗体の交差反応性や非特異性の問題を回避してバックグラウンドシグナルを減少させることができる。 しかし、一次抗体に結合できる蛍光分子の数が限られているため、直接免疫蛍光法は間接免疫蛍光法よりも感度が低くなります。

二次（間接）免疫蛍光法

二次（間接）免疫蛍光法では、2つの抗体を使用します。非標識の一次（一次）抗体が標的分子に特異的に結合し、蛍光色素を持つ二次抗体が一次抗体を認識しそれに結合するのです。 1つの一次抗体に複数の二次抗体を結合させることができる。 これにより、1つの抗原あたりの蛍光色素の分子数が増え、シグナルが増幅される。 このプロトコルは、上記の一次（または直接）プロトコルに比べて複雑で時間がかかるが、ある一次抗体に対してさまざまな二次抗体や検出技術を使用できるため、より柔軟性がある

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