La néphélémétrie est une technique utilisée en immunologie pour déterminer les niveaux de plusieurs protéines du plasma sanguin. Par exemple les taux totaux d’anticorps isotypes ou classes : Immunoglobuline M, Immunoglobuline G, et Immunoglobuline A. Elle est importante dans la quantification des chaînes légères libres dans des maladies telles que le myélome multiple. La quantification est importante pour la classification de la maladie et pour le suivi de la maladie une fois qu’un patient a été traité (une augmentation de l’asymétrie du rapport entre les chaînes légères kappa et lambda après qu’un patient a été traité est une indication de récidive de la maladie).

Elle est réalisée en mesurant la lumière diffusée à un angle par rapport à l’échantillon mesuré. Dans la néphélémétrie diagnostique, la branche ascendante de la courbe de Heidelberger-Kendall est prolongée en optimisant le déroulement de la réaction de sorte que les signaux de mesure de la plupart des protéines plasmatiques (du sang humain) tombent du côté gauche de la courbe de Heidelberger-Kendall, même à des concentrations très élevées.

Cette technique est largement utilisée dans les laboratoires cliniques car elle est relativement facilement automatisable. Elle est basée sur le principe qu’une suspension diluée de petites particules va diffuser la lumière (généralement un laser) qui la traverse plutôt que de simplement l’absorber. La quantité de diffusion est déterminée en collectant la lumière sous un angle (généralement à 30 et 90 degrés).

L’anticorps et l’antigène sont mélangés à des concentrations telles que seuls de petits agrégats se forment et ne se déposent pas rapidement au fond. La quantité de diffusion de la lumière est mesurée et comparée à la quantité de diffusion de mélanges connus. La quantité de l’inconnu est déterminée à partir d’une courbe standard.

La néphélémétrie peut être utilisée pour détecter soit un antigène soit un anticorps, mais elle est généralement réalisée avec l’anticorps comme réactif et l’antigène du patient comme inconnu. Dans le laboratoire médical d’immunologie, deux types de tests peuvent être réalisés : « néphélométrie de point final » et « néphélométrie cinétique (taux) ».

Les tests de néphélométrie au point final sont réalisés en laissant la réaction anticorps/antigène se dérouler jusqu’à son terme (jusqu’à ce que tous les anticorps réactifs présents et les antigènes de l’échantillon du patient présents qui peuvent s’agréger l’aient fait et que plus aucun complexe ne puisse se former). Cependant, les grandes particules tomberont de la solution et provoqueront une fausse lecture de diffusion, c’est pourquoi la néphélométrie cinétique a été conçue.

En néphélométrie cinétique, le taux de diffusion est mesuré juste après l’ajout du réactif. Tant que le réactif est constant, le taux de changement peut être considéré comme directement lié à la quantité d’antigène présente.

Dans la néphélométrie cinétique, le taux de diffusion est mesuré juste après l’ajout du réactif.