Charles V a dû trouver un autre portrait, d’Autriche celui qu’Isabella de Portugal a envoyé à Margret avant sa mort. Sa sœur envoya le portrait en novembre Charles fut très déçu, il ne ressemblait pas à celui de sa femme. N’étant pas satisfait du portrait il a du demander au Titien de trouver un art qui ressemble à sa femme.
Titien a peint des portraits d’Isabella en 1545, Titien l’a meublé et la femme de Charles avait une robe noire et sur ses genoux elle avait des fleurs derrière elle elle avait une magnifique couronne. Dans le palais EI Pardo, cet art a été détruit par un incendie, cette histoire est dans les imprimés et plusieurs copies. Le portrait avait perdu le nez, Charles l’a donc emmené à Augsbourg pour que l’artiste puisse travailler dessus et repeindre le nez. En septembre 1548, l’artiste a utilisé l’ancien modèle pour réaliser le modèle actuel, qui a également été peint à Augsbourg. Charles et Isabelle avaient un portrait ensemble et un double dans la collection Fundacion Casa de Alba à Madrid c’était la meilleure et la première combinaison d’Isabelle du Portugal et de Charles V.
L’art du Titien apportait des souvenirs d’Isabelle du Portugal et celui qui avait les deux rappelait à Charles son épouse. Charles était demandeur d’arts et il ne voulait pas de peintures exactes mais voulait visualiser celles qu’il avait dans son esprit. Charles voulait que Titien peigne le portrait du nez perdu parce qu’il pouvait le peindre de la manière dont le nez apparaissait. Les portraits réalisés de son vivant avaient l’air réels. Ils montraient comment Isabelle du Portugal avait un nez aquilin, une caractéristique unique remarquée par beaucoup. Titien a dû faire la même correction, passant d’un nez droit classique à un nez courbe comme celui d’Isabelle du Portugal. Les petites choses dans les portraits qui ont apporté des souvenirs d’Isabella ont fait que Charles a gardé les arts proches et tout cela est conservé dans des documents comme Yuste et Bruxelles où le dernier a été documenté en 1556 et le premier en 1558.
Les portraits que Titien a fait étaient proches de ceux de Giulio Romano. Celui d’Eleonora Gonzaga une duchesse d’Urbino est ce que Titien a regardé et a utilisé les compétences dans les peintures pour faire des portraits d’Isabella. Les images d’Isabelle du Portugal étaient en quelque sorte un défi, puisqu’il ne s’agissait pas d’une réalité mais juste d’un souvenir. Les portraits d’Isabelle du Portugal sont un excellent travail réalisé par le Titien. Cependant, si l’on regarde de plus près, on constate que la toile utilisée était auparavant une œuvre d’art féminine. La toile peinte Isabelle du Portugal a été offerte à Marie, sœur de Philippe II. Elle était destinée à un couvent appelé Descalzas Reales. En 1636 elle a été prise à Madrid à l’Alcazar elle est restée là pendant les mêmes années jusqu’à ce qu’il y ait un incendie en 1734.