Types d’immunofluorescence

Il existe deux classes de techniques d’immunofluorescence, la primaire (ou directe) et la secondaire (ou indirecte).

Primaire (directe)

L’immunofluorescence primaire, ou directe, utilise un seul anticorps qui est chimiquement lié à un fluorophore. L’anticorps reconnaît la molécule cible et se lie à elle, et le fluorophore qu’il porte peut être détecté par microscopie. Cette technique présente plusieurs avantages par rapport au protocole secondaire (ou indirect) ci-dessous en raison de la conjugaison directe de l’anticorps au fluorophore. Cela réduit le nombre d’étapes de la procédure de coloration, ce qui rend le processus plus rapide et peut réduire le signal de fond en évitant certains problèmes de réactivité croisée ou de non-spécificité des anticorps. Cependant, comme le nombre de molécules fluorescentes qui peuvent être liées à l’anticorps primaire est limité, l’immunofluorescence directe est moins sensible que l’immunofluorescence indirecte.

Immunofluorescence secondaire (indirecte)

L’immunofluorescence secondaire, ou indirecte, utilise deux anticorps ; le premier anticorps (primaire) non marqué se lie spécifiquement à la molécule cible, et l’anticorps secondaire, qui porte le fluorophore, reconnaît l’anticorps primaire et s’y lie. Plusieurs anticorps secondaires peuvent se lier à un seul anticorps primaire. Cela permet d’amplifier le signal en augmentant le nombre de molécules de fluorophore par antigène. Ce protocole est plus complexe et plus long que le protocole primaire (ou direct) ci-dessus, mais il permet une plus grande flexibilité car une variété d’anticorps secondaires et de techniques de détection différentes peuvent être utilisés pour un anticorps primaire donné.