Kaarle V:n oli löydettävä toinen muotokuva, Itävallasta se, jonka Portugalin Isabella lähetti Margretille ennen kuolemaansa. Hänen sisarensa lähetti muotokuvan marraskuussa Kaarle oli hyvin pettynyt siihen, ettei se näyttänyt hänen vaimolleen tarkoitetulta. Koska hän oli tyytymätön muotokuvaan, hänen oli pyydettävä Tiziania etsimään taidetta, joka muistuttaisi hänen vaimoaan.

Titian maalasi Isabellan muotokuvan vuonna 1545, Tizian sisusti sen ja Kaarlen vaimolla oli musta mekko ja sylissään hänellä oli kukkia hänen takanaan hänellä oli upea kruunu. El Pardon palatsissa tämä taide tuhoutui tulipalossa tämä tarina on tulosteissa ja useissa kopioissa. Muotokuvasta oli kadonnut nenä, joten Kaarle vei sen Augsburgiin, jotta taiteilija voisi maalata nenän uudelleen. Syyskuussa 1548 taiteilija käytti vanhaa mallia nykyisen mallin tekemiseen, ja myös se maalattiin Augsburgissa. Kaarlella ja Isabellalla oli yhteinen muotokuva ja kaksoiskuva Fundacion Casa de Alba -kokoelmassa Madridissa tämä oli paras ja ensimmäinen yhdistelmä Portugalin Isabellasta ja Kaarle V:stä.

Tizianin taide toi muistoja Portugalin Isabellasta ja se, jossa oli molemmat, muistutti Kaarlea hänen vaimostaan. Kaarle pyysi taidetta eikä hän halunnut tarkkoja maalauksia, vaan hän halusi visualisoida ne, jotka hänellä oli mielessään. Kaarle halusi Tizianin maalaavan kadonneen nenän muotokuvan, koska hän pystyi maalaamaan sen sellaisena kuin nenä näkyi. Hänen elinaikanaan tehdyt muotokuvat näyttivät aidoilta ne osoittivat, että Portugalin Isabellalla oli akvilineaarinen nenä, joka oli ainutlaatuinen piirre, jonka monet huomasivat. Tizianin oli tehtävä sama korjaus klassisesta suorasta nenästä kaarevaan nenään, joka Portugalin Isabellalla oli. Pienet asiat muotokuvissa, jotka toivat muistoja Isabellasta, saivat Kaarlen pitämään taiteen lähellä, ja kaikki tämä on säilytetty asiakirjoissa, kuten Yuste ja Bryssel, joista jälkimmäinen on dokumentoitu vuonna 1556 ja edellinen vuonna 1558.

Titianin tekemät muotokuvat olivat lähellä Giulio Romanon muotokuvia. Yksi Eleonora Gonzaga Urbinon herttuatar on mitä Tizian katsoi ja käytti taidot maalauksia tehdä Isabella muotokuvia. Portugalin Isabellan kuvat olivat jotenkin haastavia, koska ne eivät olleet todellisuutta vaan vain muistoja herättäviä. Portugalin Isabellan muotokuvat olivat hienoa työtä, jonka Tizian teki, mutta jos tarkkaan katsoi, se osoitti, että käytetty kangas oli aiemmin naisen taidetta. Portugalin Isabellaksi maalattu kangas annettiin Filip II:n sisarelle Marialle. Se oli tarkoitettu Descalzas Reales -nimistä luostaria varten. Vuonna 1636 se vietiin Madridin Alcazariin, jossa se säilyi samat vuodet, kunnes siellä syttyi tulipalo vuonna 1734.