Mikä on solulinja?

Solulinjalla tarkoitetaan solulinjaa, jossa tiettyä solutyyppiä viljellään pysyvästi in vitro siten, että se tuottaa jatkuvasti soluja, kunhan niille annetaan tuoretta kasvualustaa.

Image Credits: Jens Goepfert / .com

Solulinja eroaa tavallisesta soluviljelystä, koska solulinjan solut on kuolemattomaksi tehty. Solujen kuolemattomaksi tekemisessä solulinjan solut mutatoidaan siten, että ne jakautuvat jatkuvasti eivätkä saavuta tiettyä kasvun rajaa. Primaarisessa soluviljelmässä olevat solut sen sijaan otetaan suoraan kudoksesta, ja niillä on tietty elinikä.

Solulinjan edut verrattuna primaariseen soluviljelyyn:

• Tarjoaa rajoittamattoman määrän solumateriaalia tutkittavaksi
• Tuottaa aina samanpuhtaita soluja, joten tulokset ovat toistettavissa
• Kustannustehokas
• Helppo ylläpitää

Mihin tarvitsemme solulinjoja?

Solulinjan perustaminen on erittäin yleinen käytäntö solu- ja molekyylibiologisessa tutkimuksessa. Näillä soluilla voidaan tutkia monia erilaisia solujen aineenvaihdunnan ja geenien toiminnan osa-alueita sekä valmistaa rokotteita, vasta-aineita ja tiettyjä lääkkeitä.

Erilaisia solulinjoja käytetään tiettyihin tarkoituksiin. Esimerkiksi HeLa-solulinjoja käytetään yleisesti syövän tutkimiseen, HEK-soluja (Human Embryonic Kidney, ihmisen alkion munuainen) käytetään usein geeniekspression tutkimiseen ja CHO-soluja (Chinese Hamster Ovarian, kiinalaisen hamsterin munasarjasolut) käytetään usein geenitekniikkaan tai tiettyjen tuotteiden synteesiin.

Mitä reportteri-leimattuja solulinjoja voidaan tarjota?

Reportteri-leimattuja solulinjoja, joita kutsutaan lyhyesti myös reportterisolu-linjoiksi, voidaan käyttää erilaisiin sovelluskohteisiin kuin tavallista solulinjaa. Niitä voidaan käyttää proteiinien, transkriptiotekijöiden tai muiden molekyylien ilmentymisen visualisointiin ja seurantaan sekä mahdollisesti niiden sijainnin seuraamiseen kokonaisten solujen sisällä reaaliajassa. Näin tutkijat voivat varmistaa, että heidän solulinjansa edustavat tarkasti luonnollisissa kudoksissa tapahtuvia normaaleja aineenvaihdunnan muutoksia, ja mikä vielä tärkeämpää, he voivat määrittää, mitkä geenit ilmentyvät aktiivisesti solussa.

Miten reportterimerkityt solulinjat toimivat?

Reportaattorisolulinjan tavallisin tavoite on mitata tiettyjen geenien ilmentymistä tai tiettyjen proteiinien tuotantoa. Tämä tehdään tuomalla reportterigeenejä solulinjaan.

Reportaattorigeeneinä voidaan käyttää erilaisia geenejä, ja ne valitaan yleensä mitattavan aktiivisuuden laajuuden perusteella. Esimerkiksi luciferaasin tai GFP:n (vihreä fluoresoiva proteiini) geeniä käytetään usein, koska molemmat tuotetut proteiinit voidaan laukaista tuottamaan mitattavaa fluoresenssia. Tämä fluoresenssi voidaan mitata joko luminometrillä tai spektrofotometrillä.

Valittu reportterigeeni asetetaan vektoriin tietyn tutkittavan geenipromoottorin viereen, ja käytettävä solulinja transfektoidaan sitten tällä vektorilla. Jos promoottori ilmentyy aktiivisesti solulinjassa, reportterigeeni ilmentyy, mikä voidaan mitata.

Miten tätä järjestelmää voidaan hyödyntää?

Tämä järjestelmä perustuu pääasiassa sen mittaamiseen, ilmentyvätkö tietyt promoottorit, mutta sitä voidaan käyttää mittaamaan erilaisten sellaisten biokemiallisten reittien aktiivisuutta, joilla on alavirtaan tulevia signaaleja, jotka päättyvät geenien transkriptioon. Määrittämällä, ilmentyvätkö tietyt geenit, voidaan myös määrittää, onko solulinja saanut virusinfektion, tai antaa viitteitä syövän kehittymisestä.

Tämä järjestelmä on siis erittäin hyödyllinen erilaisten sairauksien tutkimisessa, koska se tuottaa helposti tulkittavia tuloksia siitä, miten eri geenit ilmentyvät eri olosuhteissa.

Lisälukemista

• Kaikki solumerkintäsisällöt
• Nukleiinihappomerkintöjen yleiskatsaus
• Bioorthogonaaliset kemialliset reportterit
• Adipo-Clear
• DNA:n merkitseminen DAPI:n avulla: Methodology

Sitaatit

.