Vuonna 1440 italialainen pappi, humanisti, retorikko ja puhuja Lorenzo Valla levitti käsikirjoituksena De falso credita et ementita Constantini Donatione declamatio -teoksen, jossa hän todisti historiallisin ja kielitieteellisin perustein, että Konstantinuksen lahjoitus oli väärennös. Kirkon vastustuksen vuoksi essee julkaistiin virallisesti painettuna vasta Ulrich von Huttenin vuonna 1517 julkaisemassa painoksessa. Siitä tuli suosittu protestanttien keskuudessa, ja englanninkielinen käännös julkaistiin Thomas Cromwellille vuonna 1534. Valla perusteli asiansa niin vakuuttavasti, että se on edelleen voimassa, ja Konstantinuksen lahjoituksen laittomuus myönnetään yleisesti.

Valla osoitti, että asiakirjaa ei mitenkään voitu kirjoittaa Konstantinus I:n historiallisella aikakaudella (4. vuosisadalla), koska sen kansankielinen tyyli ajoittui yksiselitteisesti myöhemmälle aikakaudelle (8. vuosisadalle). Yksi Vallan perusteluista oli se, että asiakirja sisälsi sanan satrappi, jota hänen mielestään Konstantinus I:n kaltaiset roomalaiset eivät olisi käyttäneet.

Vaikka Konstantinuksen lahjoitus sai aluksi osakseen paljon kritiikkiä, se kuitenkin hyväksyttiin lailliseksi, erityisesti sen sisällön länsimaista kirkkoa hyödyttävän luonteen vuoksi. Konstantinuksen lahjoituksessa esitettiin, että Konstantinus I ”lahjoitti” koko läntisen Rooman valtakunnan roomalaiskatoliselle kirkolle kiitollisuuden osoituksena siitä, että paavi Sylvester I oli parantanut hänet ihmeellisesti spitaalista. Tämä olisi ilmeisesti jättänyt huomiotta Pepin Lyhyen oman Pepinin lahjoituksen, jossa lombardeille annettiin maata Rooman pohjoispuolella.

”Vallan motiivina paljastaa Konstantinuksen lahjoitus petokseksi oli hänen silloinen työnantajansa, Aragonian Alfonso, joka oli sekaantunut alueelliseen konfliktiin paavinvaltioiden kanssa, jotka olivat tuolloin paavi Eugenius IV:n alaisuudessa. Konstantinuksen lahjoitukseen oli usein vedottu paavin maallisen vallan tukemiseksi ainakin 1100-luvulta lähtien.” (Wikipedian artikkeli Lorenzo Vallasta, luettu 17.1.2009).