Jacksons Plattenkarriere begann angeblich mit einer Mutprobe bei einem Talentwettbewerb 1964 im Harlemer Nachtclub Smalls Paradise, den sie gewann. Obwohl sie 1970 ihre ersten Aufnahmen für MGM Records machte, verließ sie diese bald und begann eine lange Zusammenarbeit mit dem New Yorker Label Spring Records. In Zusammenarbeit mit dem Hausproduzenten des Labels, Raeford Gerald, war ihre erste Single, die in den Charts landete, 1971 das trügerisch betitelte „A Child of God (It’s Hard to Believe)“, das Platz 22 in den R&B-Charts erreichte. 1972 hatte Jackson ihre erste R&B-Top-Ten-Single mit dem Nachfolger „Ask Me What You Want“, der ebenfalls die Top 30 der Pop-Charts erreichte. „My Man, A Sweet Man“ erreichte Platz 7 der R&B-Charts und Platz 50 der UK-Singles-Charts; alle drei Songs wurden von Jackson mitgeschrieben. „My Man, A Sweet Man“ besteht aus Northern Soul, ebenso wie ihre 1976er Aufnahme „A House for Sale“. Das folgende Jahr brachte ihren dritten US-R&B-Top-Ten-Hit, „It Hurts So Good“, der es auf Platz 3 der R&B-Charts und auf Platz 24 der US Billboard Hot 100 Pop-Charts schaffte. Die Single war auf dem gleichnamigen Album und in dem Blaxploitation-Film Cleopatra Jones zu hören.

Im Jahr 1974 veröffentlichte sie das Album Caught Up, das ihren innovativen Stil der schlüpfrigen gesprochenen Worte einführte. Die wichtigste Veröffentlichung war ihre Version von Luther Ingrams Millionenseller „(If Loving You Is Wrong) I Don’t Want to Be Right“, für die sie zwei Grammy-Nominierungen erhielt. Inzwischen hatte sie den Produzenten gewechselt und arbeitete nur noch mit Brad Shapiro zusammen, der bereits an „It Hurts So Good“ und „Love Doctor“ beteiligt war. Im Muscle Shoals Studio in Alabama arbeitete sie mit der berühmten Muscle Shoals Rhythm Section zusammen und nahm dort den Großteil ihres Materials für Spring auf, darunter auch das Nachfolgealbum Still Caught Up. In den nächsten zehn Jahren hatte Jackson eine Reihe erfolgreicher Alben und zahlreiche Einträge in den R&B-Charts. Der größte Erfolg war 1977 ihre Version von Merle Haggards Country-Hit „If You’re Not Back in Love By Monday“. Dieser Single folgten viele weitere, darunter ihre Version des Boney M. Songs, die Disco-Single „Never Change Lovers in the Middle of The Night“. Diese Single erreichte 1979 Platz 33 der Black-Singles-Charts.

Jackson nahm 1979 ein Album mit Isaac Hayes namens „Royal Rappin’s“ auf und veröffentlichte im selben Jahr ein Doppelalbum, „Live And Uncensored“, das bei einem Konzert im The Roxy in Los Angeles aufgenommen wurde, und „Live and Outrageous“ im Mr. V’s Figure8 in Atlanta. Jackson gründete und produzierte auch die Gruppe Facts of Life. Sie hatten 1976 einen großen Hit mit „Sometimes“ (#3 R&B, No. 31 Pop). Als Spring 1984 geschlossen wurde, stand Jackson ohne Label da, aber 1986 unterschrieb sie bei Jive Records, wo sie vier Alben veröffentlichte und mit „Hot! Wild! Unrestricted! Crazy Love“ und „Love Is a Dangerous Game“. 1985 trat sie auf einem Elton-John-Song auf, „Act Of War“, der in Großbritannien ein Top-40-Hit war, aber in den USA nicht in die Charts kam. 1991 schrieb, produzierte und spielte sie die Hauptrolle in dem erfolgreichen Tourneestück Young Man, Older Woman, das auf ihrem gleichnamigen Album für Jive basiert. Am 24. November 1994 trat Jackson in der Thanksgiving-Folge Feast or Famine von Martin als Florine auf. Im Jahr 2000 war ihre Stimme in „Am I Wrong“ von Etienne de Crécy zu hören, das aus ihrer Performance in „(If Loving You Is Wrong) I Don’t Want to Be Right“ gesampelt wurde.

Jackson ist häufig auf „worst ever“-Listen für ihre Albumcover erschienen. E.S.P. (Extra Sexual Persuasion) zeigt Jackson, wie sie in eine Kristallkugel blickt, die ihr Dekolleté betont; Back to the S**t! zeigt Jackson auf einer Toilette sitzend, wobei angedeutet wird, dass sie defäkiert.

Jackson betreibt jetzt ihr eigenes Plattenlabel, Weird Wreckuds. Nach einer längeren Aufnahmepause veröffentlichte sie 2001 ihr Album Not For Church Folk, das eine Rückkehr zu ihrem Stil mit einem zeitgenössischen Urban-Sound markierte. Das Album enthält die Singles „Butt-A-Cize“ und „Leave Me Alone“. Das Album enthält auch eine Zusammenarbeit mit dem Rapper Da Brat bei dem Song „In My Life“. Jackson hatte 13 Jahre lang ihre eigene Radioshow in Dallas, Texas. Bis zum 6. Januar 2012 sendete sie von ihrem Haus in Atlanta, Georgia, zur Nachmittagszeit von 15 bis 18 Uhr auf KKDA 730 AM.

Im Jahr 2006 wurden fünf von Jacksons meistverkauften Alben – Millie Jackson (1972), It Hurts So Good (1973), Caught Up (1974), Still Caught Up (1975) und Feelin‘ Bitchy (1977) – digital remastered und auf CD mit Bonustracks veröffentlicht. Alle Alben aus Jacksons Spring Records-Ära sind bei Ace Records in Großbritannien erhältlich. An Imitation of Love wurde 2013 vom Label Funkytowngrooves in einer neu gemasterten, erweiterten Ausgabe auf CD wiederveröffentlicht. Andere Alben, die auf den Labels Jive und Ichiban veröffentlicht wurden, sind vergriffen, obwohl einige dieser Songs auf Compilation-CDs erscheinen. Am 6. Februar 2012 wurde der Dokumentarfilm Unsung – The Story of Mildred ‚Millie‘ Jackson auf dem TV One Network ausgestrahlt. Am 3. August 2012 trat Jackson im historischen Howard Theatre in Washington, D.C., und am 4. August 2012 im B.B. King’s Blues Club in New York auf. Am 6. Juni 2015 wurde Jackson in die Official Rhythm & Blues Music Hall of Fame in Clarksdale, Mississippi, aufgenommen.