Im Jahr 1440 brachte der italienische Priester, Humanist, Rhetoriker und Redner Lorenzo Valla das Manuskript De falso credita et ementita Constantini Donatione declamatio in Umlauf, in dem er aus historischen und sprachlichen Gründen bewies, dass die Konstantinische Schenkung eine Fälschung war. Aufgrund des kirchlichen Widerstands wurde der Aufsatz erst in der Ausgabe von Ulrich von Hutten von 1517 offiziell im Druck veröffentlicht. Sie wurde unter den Protestanten populär, und eine englische Übersetzung wurde 1534 für Thomas Cromwell veröffentlicht. Valla argumentierte so überzeugend, dass sein Argument bis heute Bestand hat und die Unrechtmäßigkeit der Konstantinischen Schenkung allgemein anerkannt wird.

Valla zeigte, dass das Dokument unmöglich in der historischen Epoche Konstantins I. (4. Jahrhundert) verfasst worden sein konnte, da sein volkstümlicher Stil eindeutig aus einer späteren Epoche (8. Jahrhundert) stammte. Einer von Vallas Gründen war, dass das Dokument das Wort Satrap enthielt, von dem er glaubte, dass Römer wie Konstantin I. es nicht verwendet hätten.

Obwohl die Konstantinische Schenkung anfangs auf große Kritik stieß, wurde sie als legitim akzeptiert, vor allem wegen des Nutzens, den ihr Inhalt für die westliche Kirche hatte. Die Konstantinische Schenkung suggerierte, dass Konstantin I. das gesamte Weströmische Reich der römisch-katholischen Kirche „geschenkt“ habe, als Dank dafür, dass er von Papst Sylvester I. auf wundersame Weise vom Aussatz geheilt worden war. Damit wäre die Schenkung von Pepin dem Kurzen, der den Langobarden Land nördlich von Rom geschenkt hatte, natürlich nicht berücksichtigt worden.

„Valla wurde von seinem damaligen Arbeitgeber, Alfons von Aragon, der in einen Territorialkonflikt mit dem Kirchenstaat unter Papst Eugen IV. verwickelt war, dazu motiviert, die Konstantinische Schenkung als Betrug zu entlarven. Die Konstantinische Schenkung wurde oft zitiert, um die weltliche Macht des Papsttums zu stützen, zumindest seit dem 11. Jahrhundert“ (Wikipedia-Artikel über Lorenzo Valla, Zugriff am 17.01.2009).