Arten der Immunfluoreszenz

Es gibt zwei Klassen von Immunfluoreszenztechniken, die primäre (oder direkte) und die sekundäre (oder indirekte).

Primäre (direkte)

Die primäre oder direkte Immunfluoreszenz verwendet einen einzelnen Antikörper, der chemisch mit einem Fluorophor verbunden ist. Der Antikörper erkennt das Zielmolekül und bindet daran, und das Fluorophor, das er trägt, kann durch Mikroskopie nachgewiesen werden. Diese Technik hat mehrere Vorteile gegenüber dem sekundären (oder indirekten) Protokoll, da der Antikörper direkt mit dem Fluorophor konjugiert wird. Dadurch verringert sich die Anzahl der Schritte im Färbeverfahren, was den Prozess beschleunigt und das Hintergrundsignal reduzieren kann, da einige Probleme mit Antikörper-Kreuzreaktivität oder Unspezifität vermieden werden. Da jedoch die Anzahl der fluoreszierenden Moleküle, die an den primären Antikörper gebunden werden können, begrenzt ist, ist die direkte Immunfluoreszenz weniger empfindlich als die indirekte Immunfluoreszenz.

Sekundäre (indirekte)

Bei der sekundären oder indirekten Immunfluoreszenz werden zwei Antikörper verwendet; der unmarkierte erste (primäre) Antikörper bindet spezifisch an das Zielmolekül, und der sekundäre Antikörper, der das Fluorophor trägt, erkennt den primären Antikörper und bindet an ihn. Mehrere sekundäre Antikörper können an einen einzigen primären Antikörper binden. Dies führt zu einer Signalverstärkung, indem die Anzahl der Fluorophormoleküle pro Antigen erhöht wird. Dieses Protokoll ist komplexer und zeitaufwändiger als das oben beschriebene primäre (oder direkte) Protokoll, bietet aber mehr Flexibilität, da für einen bestimmten primären Antikörper eine Vielzahl verschiedener sekundärer Antikörper und Nachweisverfahren verwendet werden kann.