Genotoksicitet henviser til et stofs evne til at beskadige cellernes genetiske information (ændringer i strukturen, sekvensen og/eller antallet af gener), hvilket kan have direkte eller indirekte virkninger som f.eks. induktion af mutationer, aktivering eller inaktivering af gener. DNA-reparations- eller apoptoseveje aktiveres normalt for at reparere eller kontrollere skaden; hvis skaden imidlertid fastholdes, kan der opstå mutationer og endog kræft. Mange gange er ændringerne permanente og arvelige, og de kan derfor påvirke både somatiske celler og kønsceller, som vil blive videregivet til fremtidige generationer. Af definitionen fremgår det klart, at alle mutagene stoffer har genotoksicitet, men genotoksiske forbindelser er ikke nødvendigvis mutagene. Genotoksicitet påvirker patienternes og endda deres børns sundhed og er derfor et vigtigt aspekt, der skal tages i betragtning i forbindelse med IND-tilladelse. Desuden er genotoksicitetsanalyser også almindelige in vitro-tests til at forudsige kræftfremkaldende egenskaber. Creative Biolabs har udviklet forskellige metoder til vurdering af lægemiddelkandidaternes genotoksicitet og hjælper kunderne med at indsamle oplysninger til IND-godkendelse.

Målet med genotoksicitetstest er at fastslå, om en lægemiddelkandidat vil beskadige genetiske materialer i celler og forårsage kræft. I sådanne test måles DNA-skader (f.eks. punktmutationer, strengt brud, krydsforbindelser, strukturelle og/eller numeriske kromosomale aberrationer og tab af excisionsreparation) i cellerne efter eksponering for stoffet. Der findes en række forskellige genotoksicitetstest, som kan udføres i bakterie-, gær- og pattedyrceller. Ames-test og Escherichia coli reverse mutation assay er to in vitro mutagenicitetstestmetoder baseret på bakterieceller, mens pattedyrs kromosomaberrationstest og pattedyrs cellegenmutationstest er baseret på pattedyrsceller. Ames-test og Comet-test er to af de mest populære metoder, der anvendes til at vurdere kemikaliernes potentiale til at forårsage DNA-skader og kræft.

Ames-test (Bacterial Reverse Mutation Assay)

Ames-test anvender auxotrofe mutante bakteriestammer, der kræver histidin fra omgivelserne for at vokse. I Ames-testen skal cellerne, hvis det testede stof er i stand til at skabe mutationer (genotoksiske), der resulterer i en prototrof tilstand hos stammerne, have normal vækst på et histidinfrit medium.

Figur 1. Ames-test.

Comet Assay (Single Cell Gel Electrophoresis Assay)

Comet Assay er en af de mest almindelige genotoksicitetstest. Cellerne lyseres med detergenter og salte, og det frigjorte DNA går gennem agarosegelelektroforese under næsten neutrale pH-betingelser. Jo flere dobbeltstrengsbrud en celle indeholder, jo hurtigere vil DNA’et vandre mod anoden. Denne teknik er ret følsom til at påvise DNA-skader, nem og billig at udføre og hurtig til at få testresultaterne.

Andre in vitro- og in vivo-toksikologiske test såsom muselymfom TK+/- assay, SOS/umu-assay og in vitro- og in vivo-mikronukleustest anvendes også til bestemmelse af stoffers genotoksicitet.

Creative Biolabs tilbyder også andre tjenester til lægemiddelforskning. For mere detaljerede oplysninger er du velkommen til at kontakte os eller sende os direkte en forespørgsel.

Kun til laboratorieforskningsbrug.