Diane de Poitiers blev født af aristokratiske forældre på slottet Saint-Vallier i de franske alper som en berømt ægtefælle til den franske kong Henri 2. Hun giftede sig som femtenårig med Louis de Breze, en hofmand og barnebarn af kong Karl VII. Ved sin mands død i 1531 sørgede hun for, at hans titler som seneskal (kongens repræsentant) i Normandiet overgik til hende selv, i stedet for at lade dette embede gå tilbage til kongen, hvilket var den traditionelle praksis. Efter at Frans I overtog tronen, blev Diane ledsager til hans sønner. Da Frans blev taget til fange i slaget ved Pavia i 1525, tilbød han sine sønner Francois og Henri som gidsler i bytte for sin frihed. Da Henri vendte tilbage til Frankrig i en alder af 12 år, blev Diane hans lærer og vejleder. De to kom tæt på hinanden, og efterhånden som han blev moden, forelskede Henri sig i sin mentor.

Langt før Henri blev konge af Frankrig i 1547, blev Diane hans foretrukne elskerinde, rådgiver og ledsagerinde. Som konge betroede Henri vigtig korrespondance og dokumenter til hende og stolede på hendes råd i vigtige statsanliggender. Diane kom til at udøve mere autoritet ved det franske hof end Henri’s dronning, Catherine de Médicis, og på trods af at Catherine var en fjern kusine til Diane, gjorde deres rivalisering om Henri’s hengivenhed dem til bitre fjender. Henri begunstigede Diane ved at lade bygge slottet Anet til hende, gav hende titlen hertuginde af Etampes og tillod hende at forvalte kronjuvelerne og slottet Chenonceau, en af de mest prægtige kongelige residenser i Europa. I 1559 døde Henri imidlertid af de kvæstelser, han havde pådraget sig i en duel, og kort efter tog hans jaloux dronning Catherine kronjuvelerne i besiddelse og forviste Diane permanent fra Chenonceau.