Biomolekylære interaktioner er grundlæggende for langt de fleste cellulære processer, og identifikation af de vigtigste interagerende komponenter er normalt det første skridt i retning af en forståelse af de mekanismer, der styrer forskellige cellefunktioner. Statistiske billedanalyser, der kan udføres på fluorescensmikroskopibilleder af fikserede eller levende celler, er således blevet anvendt rutinemæssigt til biofysiske og cellebiologiske undersøgelser. Disse metoder måler andelen af interagerende partikler ved at analysere tofarvede fluorescensbilleder for kolokaliserede pixels. Kolokaliseringsalgoritmer har vist sig at være effektive, selv om dynamikområdet og nøjagtigheden af disse målinger aldrig har været veletableret. Spatial image cross-correlation spectroscopy (ICCS), som krydskorrelerer rumlige intensitetsfluktuationer, der registreres i billeder fra to detektionskanaler samtidigt, er også for nylig blevet vist at være et effektivt mål for kolokalisering. Gennem simuleringer, billeddannelse af fluorescerende antistoffer adsorberet på glas og cellemålinger viser vi, at ICCS klarer sig meget bedre end standardkolokaliseringsalgoritmer ved moderate til høje partikeltætheder, som ofte forekommer i cellulære systemer. Desuden blev det fundet, at tæthedsforholdet mellem de to mærkede arter af interesse spiller en stor rolle for nøjagtigheden af kolokaliseringsanalysen. Ved at anvende en direkte og systematisk sammenligning mellem den standard, fluorescensmikroskopiske kolokaliseringsalgoritme og rumlig ICCS viser vi regimer, hvor hver tilgang er anvendelig, og endnu vigtigere, hvor de ikke giver nøjagtige resultater.