Vad är en cellinje?

En cellinje är när en viss celltyp odlas permanent in vitro för att kontinuerligt producera celler, så länge de får färska medier att växa på.

Bildkrediter: Jens Goepfert / .com

En cellinje skiljer sig från normal cellodling eftersom cellerna i en cellinje har odödats. Cellimmortalisering innebär att cellerna i en cellinje är muterade på ett sätt som gör att de ständigt delar sig och inte når en viss tillväxtgräns. Celler inom en primär cellkultur tas däremot direkt från vävnad och har en bestämd livslängd.

Fördelar med en cellinje jämfört med primär cellkultur:

• Gör ett obegränsat utbud av cellmaterial för studier
• Genomgående produceras samma renhet på cellerna så att resultaten är reproducerbara
• Kostnadseffektivt
• Lätt att underhålla

Varför behöver vi cellinjer?

Att upprätta en cellinje är en mycket vanlig metod inom cell- och molekylärbiologisk forskning. Dessa celler kan användas för att studera en mängd olika områden av cellulär metabolism och genfunktion, samt användas för att tillverka vacciner, antikroppar och vissa läkemedel.

Olika cellinjer används för specifika ändamål. Till exempel används HeLa-cellinjer vanligen för att studera cancer, HEK-celler (Human Embryonic Kidney) används ofta för att studera genuttryck och CHO-celler (Chinese Hamster Ovarian) används ofta för genteknik eller för syntes av specifika produkter.

Vad kan reporter-märkta cellinjer erbjuda?

Reporter-märkta cellinjer, som också helt enkelt kallas för reporter-cellinjer, erbjuder olika tillämpningar jämfört med en normal cellinje. De kan användas för att visualisera och spåra uttrycket av proteiner, transkriptionsfaktorer eller andra molekyler samt potentiellt spåra var de befinner sig i hela celler i realtid. Detta gör det möjligt för forskare att se till att deras cellinjer exakt representerar de normala metaboliska förändringar som sker i naturliga vävnader och, ännu viktigare, kan avgöra vilka gener som aktivt uttrycks i en cell.

Hur fungerar reportermärkta cellinjer?

Det vanligaste syftet med en reportercellinje är att mäta uttrycket av vissa gener, eller för produktion av vissa proteiner. Detta görs genom att införa reportergener i en cellinje.

Flera olika gener kan användas som reportergener, och de väljs vanligtvis utifrån omfattningen av den mätbara aktiviteten. Till exempel används ofta genen för luciferas eller GFP (grönt fluorescerande protein), eftersom båda de producerade proteinerna kan utlösas för att producera mätbar fluorescens. Denna fluorescens kan mätas med antingen en luminometer eller en spektrofotometer.

Den valda reportergenen sätts in i en vektor, bredvid en specifik genpromotor som studeras, och den cellinje som används transfekteras sedan med denna vektor. Om promotorn uttrycks aktivt i cellinjen kommer reportergenen att uttryckas, vilket kan mätas.

Hur kan detta system användas?

Detta system är främst baserat på att mäta om specifika promotorer uttrycks, men detta kan användas för att mäta aktiviteten hos olika biokemiska vägar som har nedströmssignaler som slutar med transkription av gener. Genom att bestämma om vissa gener uttrycks kan man också avgöra om en cellinje har infekterats med ett virus, eller antyda utveckling av cancer.

Detta system är därför mycket användbart vid studier av olika sjukdomar, eftersom det ger lätt tolkningsbara resultat för hur olika gener uttrycks under olika förhållanden.

Fortsatt läsning

• Allt innehåll om cellmärkning
• Översikt över nukleinsyramärkning
• Bioorthogonala kemiska rapportörer
• Adipo-Clear
• DNA-märkning med DAPI: Methodology

Citat

.