Nefelometri är en teknik som används inom immunologin för att bestämma nivåerna av flera blodplasmaproteiner. Till exempel de totala nivåerna av antikroppar isotyper eller klasser: Den är viktig vid kvantifiering av fria lätta kedjor vid sjukdomar som multipelt myelom. Kvantifieringen är viktig för sjukdomsklassificering och för sjukdomsövervakning när en patient har behandlats (ökad skevhet i förhållandet mellan kappa- och lambda-ljuskedjor efter att en patient har behandlats är en indikation på att sjukdomen återkommer).

Det utförs genom att mäta det spridda ljuset i en vinkel från det prov som mäts. Vid diagnostisk nefelometri förlängs den stigande grenen av Heidelberger-Kendall-kurvan genom att optimera reaktionsförloppet så att de flesta plasmaproteiners (från människoblod) mätsignaler faller på den vänstra sidan av Heidelberger-Kendall-kurvan, även vid mycket höga koncentrationer.

Denna teknik används i stor utsträckning i kliniska laboratorier eftersom den är relativt lätt att automatisera. Den bygger på principen att en utspädd suspension av små partiklar sprider ljus (vanligen en laser) som passerar genom den i stället för att bara absorbera det. Mängden spridning bestäms genom att samla in ljuset i en vinkel (vanligtvis 30 och 90 grader).

Antikroppen och antigenet blandas i sådana koncentrationer att endast små aggregat bildas som inte snabbt sedimenterar till botten. Mängden ljusspridning mäts och jämförs med mängden ljusspridning från kända blandningar. Mängden av den okända bestämmes från en standardkurva.

Nefelometri kan användas för att detektera antingen antigen eller antikroppar, men den utförs vanligen med antikroppar som reagens och patientens antigen som det okända. I det medicinska laboratoriet för immunologi kan två typer av tester utföras: ”slutpunktsnefelometri” och ”kinetisk (hastighet) nefelometri”.

Nefelometri med slutpunkt utförs genom att man låter antikropps-/antigenreaktionen löpa till slut (tills alla närvarande reagensantikroppar och patientprovsantigen som kan aggregeras har gjort det och inga fler komplex kan bildas). De stora partiklarna kommer dock att falla ur lösningen och orsaka en felaktig mätning av spridningen, varför kinetisk nefelometri utarbetades.

I kinetisk nefelometri mäts spridningshastigheten direkt efter det att reagenset har tillsatts. Så länge reagenset är konstant kan förändringshastigheten ses som direkt relaterad till mängden närvarande antigen.

Lämna ett svar

Din e-postadress kommer inte publiceras.