1440 spred den italienske prästen, humanisten, retorikern och talaren Lorenzo Valla manuskriptet De falso credita et ementita Constantini Donatione declamatio, där han på historiska och språkliga grunder bevisade att Konstantins donation var en förfalskning. På grund av kyrkans motstånd publicerades uppsatsen inte formellt i tryck förrän i Ulrich von Huttens utgåva från 1517. Den blev populär bland protestanter, och en engelsk översättning publicerades för Thomas Cromwell 1534. Valla argumenterade sitt fall så övertygande att det fortfarande står fast än idag, och olagligheten av Konstantins donation är allmänt erkänd.

Valla visade att dokumentet omöjligen kunde ha skrivits under Konstantin I:s historiska epok (400-talet) eftersom dess folkliga stil slutgiltigt daterades till en senare epok (800-talet). En av Vallas anledningar var att dokumentet innehöll ordet satrap som han trodde att romare som Konstantin I inte skulle ha använt.

Trots att det till en början möttes av stor kritik accepterades Konstantins donation som legitim, särskilt på grund av dess innehålls fördelaktiga karaktär för den västerländska kyrkan. Konstantins donation föreslog att Konstantin I ”donerade” hela det västromerska riket till den romersk-katolska kyrkan som en tacksamhetshandling för att han mirakulöst hade blivit botad från spetälska av påven Sylvester I. Detta skulle uppenbarligen ha uteslutit Pepin den Kurtes egen Donation of Pepin, som gav langobarderna land norr om Rom.

”Valla motiverades att avslöja Konstantins Donation of Constantine som ett bedrägeri av sin dåvarande arbetsgivare, Alfons av Aragonien, som var inblandad i en territoriell konflikt med påvestaterna, som då stod under påve Eugen IV. Konstantins donation hade ofta åberopats för att stödja påvedömets världsliga makt, åtminstone sedan 1000-talet.” (Wikipediaartikel om Lorenzo Valla, tillgängliggjordes 17-01-2009).