Typer av immunofluorescens

Det finns två klasser av immunofluorescensmetoder, primära (eller direkta) och sekundära (eller indirekta).

Primär (direkt)

Primär eller direkt immunofluorescens använder en enda antikropp som är kemiskt kopplad till en fluorofor. Antikroppen känner igen målmolekylen och binder till den, och fluoroforen som den bär på kan detekteras via mikroskopi. Denna teknik har flera fördelar jämfört med det sekundära (eller indirekta) protokollet nedan eftersom antikroppen är direkt kopplad till fluoroforen. Detta minskar antalet steg i färgningsförfarandet, vilket gör processen snabbare och kan minska bakgrundssignalen genom att man undviker vissa problem med korsreaktivitet eller ospecificitet hos antikropparna. Eftersom antalet fluorescerande molekyler som kan bindas till den primära antikroppen är begränsat, är direkt immunofluorescens dock mindre känslig än indirekt immunofluorescens.

Sekundär (indirekt)

Sekundär, eller indirekt, immunofluorescens använder två antikroppar; den omärkta första (primära) antikroppen binder specifikt målmolekylen, och den sekundära antikroppen, som bär på fluoroforen, känner igen den primära antikroppen och binder till den. Flera sekundära antikroppar kan binda en enda primär antikropp. Detta ger en signalförstärkning genom att öka antalet fluoroformolekyler per antigen. Detta protokoll är mer komplicerat och tidskrävande än det primära (eller direkta) protokollet ovan, men det ger större flexibilitet eftersom en mängd olika sekundära antikroppar och detektionstekniker kan användas för en given primär antikropp.