Biomolekylära interaktioner är grundläggande för den stora majoriteten av cellprocesser, och identifiering av de viktigaste interagerande komponenterna är vanligtvis det första steget mot en förståelse av de mekanismer som styr olika cellfunktioner. Statistiska bildanalyser som kan utföras på fluorescensmikroskopiska bilder av fixerade eller levande celler har därför tillämpats rutinmässigt för biofysiska och cellbiologiska studier. Dessa metoder mäter fraktionen av interagerande partiklar genom att analysera tvåfärgsfluorescensbilder för kolokaliserade pixlar. Kolokaliseringsalgoritmer har visat sig vara effektiva, även om dynamikområdet och noggrannheten hos dessa mätningar aldrig har varit väl etablerade. Spatial image cross-correlation spectroscopy (ICCS), som korrelerar spatiala intensitetsfluktuationer som registreras i bilder från två detektionskanaler samtidigt, har också nyligen visat sig vara ett effektivt mått på kolokalisering. Genom simuleringar, avbildning av fluorescerande antikroppar adsorberade på glas och cellmätningar visar vi att ICCS presterar mycket bättre än standardkolokaliseringsalgoritmer vid måttliga till höga partikeltätheter, som ofta förekommer i cellulära system. Vidare konstaterades att täthetsförhållandet mellan de två märkta arterna av intresse spelar en stor roll för kolokaliseringsanalysens noggrannhet. Genom att tillämpa en direkt och systematisk jämförelse mellan den vanliga, fluorescensmikroskopiska kolokaliseringsalgoritmen och spatial ICCS, visar vi regimer där varje tillvägagångssätt är tillämpbart, och ännu viktigare, där de misslyckas med att ge korrekta resultat.