Sesizări biologice ale bradikininei și ale chininelor înrudite

Kininele sunt agenți hipotensivi puternici la toate speciile de animale studiate (54). Cel mai frecvent test in vivo pentru aceste peptide este cel al tensiunii arteriale la șobolan, descris anterior. Efectele vasodilatatoare ale kininelor se măsoară în organe perfuzate izolate cu endoteliu intact, conform procedurii descrise în secțiunea IV. Efectul relaxant al kininelor în vasele arteriale este evaluat in vitro în artera carotidă de câine (57), folosind metoda descrisă de Regoli și Barabé (34). Efectul venoconstrictor se măsoară in vitro în vena jugulară de iepure (42), conform procedurii rezumate mai jos.

Venulele, prelevate de la iepuri (1,0-2,0 kg), sunt tăiate în benzi helicoidale de 2 mm lățime și 2 cm lungime și suspendate în soluție Krebs (oxigenată la 37°C) care conține un inhibitor al enzimei de conversie (Captopril, 10 μM) pentru a preveni degradarea kininei (34). Contracțiile țesutului ca răspuns la kinine sunt înregistrate așa cum s-a descris anterior și, de obicei, se măsoară curbele complete concentrație-răspuns pentru a evalua afinitățile kinininelor și ale antagoniștilor acestora. S-a demonstrat că vena jugulară de iepure conține un subtip de receptor B2 (B2A) (tabelul V).

Preparatul nevascular cel mai frecvent utilizat este ileonul de cobai, care este prelevat de la cobai de 250-350 g și preparat ca o bandă musculară netedă longitudinală, în conformitate cu Rang (37). Țesutul este suspendat in vitro în soluție Krebs (oxigenată la 37°C) și modificările de tensiune ale acestuia sunt măsurate așa cum s-a descris mai sus pentru vasele izolate (a se vedea secțiunea I). Ileonul de cobai este preparatul utilizat pentru caracterizarea subtipului de receptor B2B (tabelul V).

Receptorii B1 sunt studiați cu ajutorul benzii de aortă de iepure, preparată și manipulată în același mod ca și în cazul angiotensinei. Țesutul este aproape insensibil la kinine, în special la desArg9BK, agonistul receptorului Bt, la începutul experimentului. Sensibilitatea țesutului crește după câteva ore (până la 6-10 ore) de incubare, pe măsură ce receptorii B1 se formează de novo (55). Efectele contractile ale kininelor sunt înregistrate și analizate folosind aceleași instrumente și abordări descrise în secțiunea I pentru angiotensină. Țesuturile de iepure pot fi sensibilizate la desArg9BK prin tratarea prealabilă a animalelor cu lipopolizaharidă (LPS), care se injectează intravenos cu 5 ore înainte de uciderea animalului (56). Mecanismul de generare a receptorilor B1 de către LPS a fost investigat (60, 61). Aortele și alte țesuturi prelevate de la iepurii tratați cu LPS răspund la desArg9BK încă de la începutul incubării in vitro (56). În mod similar, arterele renale de câine exprimă în mod spontan receptorii B1 și prezintă o sensibilitate ridicată la desArg9BK (62).

Au fost utilizați diverși compuși pentru a caracteriza receptorii de kinină în organele izolate, folosind răspunsurile biologice (contractile) a trei preparate (tabelul V). Bradikininele și kallidina sunt stimulente puternice ale venei jugulare de iepure (RJV) și ale ileonului de cobai (GPI), în timp ce desArg9BK și Lys,desArg9BK sunt inactive. Ordinea opusă a potenței este observată în aorta de iepure (RA). desArg9BK este un antagonist numai pe RA. Pe aceste baze, Regoli și Barabé (54) au propus ipoteza celor doi receptori de kinină, B1 (RA) și B2 (RJV, GPI și multe alte preparate și teste), care a fost caracterizat inițial numai cu agoniști (54) și a fost caracterizat ulterior (a se vedea mai jos) cu antagoniști. Antagoniștii receptorilor B2 au fost identificați de Vavrek și Stewart (63) și ulterior îmbunătățiți de diverși cercetători (64-66) prin înlocuirea Pro3 cu hidroxiprolină (Hyp), prin adăugarea unui d-Arg la extremitatea N terminală, prin înlocuirea lui Phe8 cu Leu și prin înlocuirea dipeptidei Pro7-Phe8 cu d-Tic-Oic (67-69). Un prototip al fiecărei serii de antagoniști este raportat în tabelul V pentru a indica faptul că b-2-thienil-elanina (Thi) nu este necesară în pozițiile 5 și 9, în timp ce Hyp3 și d-Arg0 sunt importante pentru afinitate, în special pe RJV. Substituția lui Phe8 cu Leu, adăugată la celelalte modificări, conduce la d-ArgBK, care (a) este aproape lipsit de activitate agonistă și (b) este activ pe RJV, mai puțin activ pe GPI și destul de slab pe RA (B1), fiind, prin urmare, destul de selectiv pentru situsul B2. Diferența dintre valorile pA2 (cu două unități logaritmice) între RJV și GPI este o constatare determinantă pentru subdiviziunea propusă (tabelul V) a receptorilor B2 în B2A (RJV) și B2B (GPI). D-ArgBK este un antagonist competitiv, rapid reversibil atât in vivo, cât și in vitro și este diferit de Hoe 140, care este necompetitiv (neechilibru), probabil pentru că are o interacțiune prelungită atât cu situsul B2A, cât și cu situsul B2B (59, 67, 68, 70). Distincția dintre B2A și B2B este susținută de rezultatele obținute cu ultimii doi compuși (tabelul V), care diferă prin reziduul din poziția a treia. Prezența lui Hyp favorizează antagonismul (pA2 7,6) pe B2A și o activitate agonistă parțială pe B2B, în timp ce Tyr3 dă un agonist puternic pe B2A și un antagonist destul de bun (antagonist pur) pe B2B. Această nouă clasificare a fost prezentată într-un articol de sinteză (71). Situsurile funcționale ale kininei sunt, prin urmare, B, și B2 (sunt avute în vedere două subtipuri). Au fost propuși mai mulți alți receptori (B3, B4 și B5) (72-74), dar existența lor nu a fost demonstrată cu date experimentale solide (a se vedea analiza critică în Ref. 59). Eliberarea de histamină indusă de kinine din mastocitele peritoneale de șobolan este un fenomen nespecific care a fost atribuit caracterului cationic al kininelor (75, 76).

.