Charles V a trebuit să găsească un alt portret, din Austria, cel pe care Isabella a Portugaliei i l-a trimis lui Margret înainte de a muri. Sora sa a trimis portretul în noiembrie Charles a fost foarte dezamăgit că nu arăta ca unul pentru soția sa. Fiind nemulțumit de portret a fost nevoit să-i ceară lui Titian să găsească o artă care să semene cu soția sa.

Titian a pictat portretul Isabelei în 1545, Titian l-a mobilat și soția lui Charles avea o rochie neagră și în poală avea flori în spatele ei avea o coroană magnifică. În palatul EI Pardo această artă a fost distrusă cu ajutorul unui incendiu această poveste este în stampe și în mai multe exemplare. Portretul își pierduse nasul așa că Charles l-a dus la Augsburg pentru ca artistul să lucreze la el pentru a repicta nasul. În luna septembrie a anului 1548, artistul a folosit vechiul model pentru a-l face pe cel actual și a fost pictat tot la Augsburg. Charles și Isabella au avut un portret împreună și un duplicat în Colecția Fundacion Casa de Alba din Madrid aceasta a fost cea mai bună și prima combinație a Isabelei de Portugalia și a lui Charles al V-lea.

Arta lui Titian a adus amintiri despre Isabella de Portugalia și cel care îi avea pe amândoi i-a amintit lui Charles de soția sa. Charles cerea artele și nu voia tablouri exacte, ci voia să le vizualizeze pe cele pe care le avea în minte. Charles a vrut ca Titian să picteze portretul nasului pierdut pentru că îl putea picta așa cum apărea nasul. Portretele realizate în timpul vieții sale păreau reale și arătau cum Isabella a Portugaliei avea un nas acvilin, o trăsătură unică, care a fost observată de mulți. Titian a trebuit să facă aceeași corecție de la un nas clasic drept la unul curbat, așa cum avea Isabella de Portugalia. Micile lucruri din portrete care i-au adus amintiri despre Isabella l-au făcut pe Charles să păstreze arta aproape și toate acestea sunt păstrate în documente precum Yuste și Bruxelles, unde cel din urmă a fost documentat în 1556 și primul în 1558.

Portretele realizate de Titian au fost apropiate de cele ale lui Giulio Romano. Cel al Eleonorei Gonzaga o ducesă din Urbino este cel la care s-a uitat Titian și a folosit abilitățile din picturi pentru a face portretele Isabelei. Imaginile Isabelei din Portugalia au fost cumva provocatoare, deoarece nu era o realitate, ci doar una care să aducă amintiri. Portretele Isabelei de Portugalia au fost o treabă grozavă făcută de Titian însă, dacă se privea cu atenție se vedea că pânza folosită a fost anterior o artă a unei femei. Pânza pictată Isabella a Portugaliei a fost dăruită Mariei, sora lui Filip al II-lea. A fost pentru o mănăstire numită Descalzas Reales. În 1636 a fost dusă în Madrid la Alcazar a rămas acolo pentru aceiași ani până când a avut loc un incendiu în 1734.

.