Tipuri de imunofluorescență

Există două clase de tehnici de imunofluorescență, primară (sau directă) și secundară (sau indirectă).

Imunofluorescența primară (directă)

Imunofluorescența primară, sau directă, utilizează un singur anticorp care este legat chimic de un fluorofor. Anticorpul recunoaște molecula țintă și se leagă de aceasta, iar fluoroforul pe care îl poartă poate fi detectat prin microscopie. Această tehnică are mai multe avantaje față de protocolul secundar (sau indirect) de mai jos, datorită conjugării directe a anticorpului cu fluoroforul. Astfel, se reduce numărul de etape în procedura de colorare, ceea ce face ca procesul să fie mai rapid și poate reduce semnalul de fond prin evitarea unor probleme legate de reactivitatea încrucișată sau nespecificitatea anticorpilor. Cu toate acestea, deoarece numărul de molecule fluorescente care pot fi legate de anticorpul primar este limitat, imunofluorescența directă este mai puțin sensibilă decât imunofluorescența indirectă.

Imunofluorescența secundară (indirectă)

Imunofluorescența secundară, sau indirectă, utilizează doi anticorpi; primul anticorp (primar), nemarcat, se leagă în mod specific de molecula țintă, iar anticorpul secundar, care poartă fluoroforul, recunoaște anticorpul primar și se leagă de acesta. Mai mulți anticorpi secundari se pot lega de un singur anticorp primar. Acest lucru asigură amplificarea semnalului prin creșterea numărului de molecule de fluorofori per antigen. Acest protocol este mai complex și necesită mai mult timp decât protocolul primar (sau direct) de mai sus, dar permite o mai mare flexibilitate, deoarece pentru un anticorp primar dat se pot utiliza o varietate de anticorpi secundari și tehnici de detecție diferite.

.