Przegląd ten omawia nowe osiągnięcia w mikroskopii rezonansowego przeniesienia energii Förstera (FRET) i jego zastosowanie do receptorów komórkowych. Metoda ta oparta jest na kinetycznej teorii FRET, która może być wykorzystana do przewidywania FRET nie tylko w dimerach, ale także w oligomerach wyższego rzędu fluoroforów donorowych i akceptorowych. Modele oparte na takich przewidywaniach FRET mogą być dopasowane do obserwowanych histogramów wydajności FRET (zwanych również spektrogramami FRET) i użyte do oszacowania stałych wiązania wewnątrzkomórkowego, wartości energii swobodnej i stechiometrii. Te metody „spektrometrii FRET” zostały wykorzystane do analizy oligomerów tworzonych przez różne receptory w szlakach sygnalizacji komórkowej, ale do niedawna takie badania były ograniczone do receptorów rezydujących na powierzchni komórki. Aby zbadać kompleksy rezydujące wewnątrz komórki, opracowano technikę zwaną Ilościowym Obrazowaniem Mikro-Spektroskopowym (Q-MSI). Q-MSI łączy określanie struktury czwartorzędowej na podstawie spektrogramów pozornego FRET na poziomie pikseli z określaniem stężenia donora i akceptora na poziomie organelli. Odbywa się to poprzez rozdzielenie i analizę widma trzeciego markera fluorescencyjnego, który nie bierze udziału w FRET. Q-MSI zostało po raz pierwszy użyte do badania interakcji klasy cytoplazmatycznych receptorów, które wiążą wirusowe RNA i sygnalizują odpowiedź przeciwwirusową poprzez kompleksy tworzone głównie na błonach mitochondrialnych. Q-MSI ujawniło nieznane wcześniej orientacje receptorów mitochondrialnych RNA oraz interakcję pomiędzy wirusowym receptorem RNA o nazwie LGP2 a helikazą RNA kodowaną przez wirusa zapalenia wątroby. Omówiono znaczenie biologiczne tych nowych obserwacji.

Dodaj komentarz

Twój adres e-mail nie zostanie opublikowany.