Karol V musiał znaleźć inny portret, z Austrii ten, który Izabela Portugalska wysłała do Małgorzaty przed śmiercią. Jego siostra wysłała portret w listopadzie Karol był bardzo rozczarowany, że nie wyglądał jak ten dla jego żony. Będąc niezadowolony z portretu musiał poprosić Tycjana, aby znaleźć sztukę, która przypomina jego żonę.

Tycjan namalował portret Izabeli w 1545 roku, Tycjan umeblował go i żona Karola miała czarną suknię i na kolanach miała kwiaty za nią miała wspaniałą koronę. W pałacu EI Pardo sztuka ta została zniszczona przez pożar, historia ta jest w drukach i kilku kopiach. Portret stracił nos, więc Karol zabrał go do Augsburga, aby artysta mógł nad nim popracować, aby ponownie namalować nos. We wrześniu 1548 roku artysta użył starego modelu do wykonania obecnego i również został on namalowany w Augsburgu. Karol i Izabela miał portret razem i duplikat w Fundacion Casa de Alba Collection w Madrycie to było najlepsze i pierwsze połączenie Izabeli Portugalskiej i Karola V.

Sztuka Tycjana przyniósł wspomnienia Izabeli Portugalskiej i jeden, który miał zarówno z nich przypomniał Karol jego żona. Karol był wniosek sztuki i nie chciał dokładnych obrazów, ale chciał wizualizacji tych, które miał w swoim umyśle. Karol chciał, aby Tycjan namalował portret z utraconym nosem, ponieważ mógł go namalować tak, jak pojawił się nos. Portrety wykonane w czasie jej życia wyglądały prawdziwie, pokazywały, jak Izabela Portugalska miała ekwilibrystyczny nos, co było wyjątkową cechą, zauważaną przez wielu. Tycjan musiał dokonać takiej samej korekty z klasycznego prostego nosa na zakrzywiony, jaki miała Izabela Portugalska. Drobne rzeczy w portretach, które przyniosły wspomnienia o Izabeli sprawiły, że Karol utrzymywał sztukę blisko i wszystko to jest utrzymywane w dokumentach takich jak Yuste i Bruksela, gdzie ta ostatnia została udokumentowana w 1556 roku, a pierwsza w 1558.

Portrety, które Tycjan wykonał były bliskie portretom Giulio Romano. Ten z Eleonorą Gonzagą, księżną Urbino, jest tym, na co Tycjan zwrócił uwagę i wykorzystał umiejętności z tych obrazów do wykonania portretów Izabeli. Isabella of Portugal images were somehow challenging, since it was not a reality but just one to bring back memories. Isabella of Portugal portrety były wielką pracę wykonaną przez Tycjana jednak, jeśli spojrzał uważnie to pokazał, że płótno używane było wcześniej sztuki kobiety. Płótno namalowane Isabella of Portugal zostało podarowane Marii, siostrze Filipa II. Było ono przeznaczone dla klasztoru zwanego Descalzas Reales. W 1636 roku zostało zabrane do Madrytu do Alcazar i pozostało tam przez te same lata, aż do pożaru w 1734 roku.