Typy immunofluorescencji

Istnieją dwie klasy technik immunofluorescencji, pierwotna (lub bezpośrednia) i wtórna (lub pośrednia).

Pierwotna (bezpośrednia)

Pierwotna, lub bezpośrednia, immunofluorescencja wykorzystuje pojedyncze przeciwciało, które jest chemicznie połączone z fluoroforem. Przeciwciało rozpoznaje cząsteczkę docelową i wiąże się z nią, a przenoszony przez nie fluorofor może być wykryty pod mikroskopem. Ta technika ma kilka zalet w porównaniu z poniższym protokołem wtórnym (lub pośrednim) z powodu bezpośredniego sprzężenia przeciwciała z fluoroforem. Zmniejsza to liczbę kroków w procedurze barwienia, dzięki czemu proces jest szybszy i może zmniejszyć sygnał tła poprzez uniknięcie pewnych problemów z reaktywnością krzyżową przeciwciał lub niespecyficznością. Jednakże, ponieważ liczba cząsteczek fluorescencyjnych, które mogą być związane z pierwotnym przeciwciałem jest ograniczona, immunofluorescencja bezpośrednia jest mniej czuła niż immunofluorescencja pośrednia.

Odpowiednia (pośrednia)

Odpowiednia lub pośrednia immunofluorescencja wykorzystuje dwa przeciwciała; nieoznakowane pierwsze (pierwotne) przeciwciało wiąże specyficznie docelową cząsteczkę, a przeciwciało wtórne, które przenosi fluorofor, rozpoznaje przeciwciało pierwotne i wiąże się z nim. Wiele przeciwciał drugorzędowych może wiązać się z jednym przeciwciałem pierwszorzędowym. Zapewnia to wzmocnienie sygnału poprzez zwiększenie liczby cząsteczek fluoroforu na antygen. Protokół ten jest bardziej złożony i czasochłonny niż powyższy protokół pierwotny (lub bezpośredni), ale pozwala na większą elastyczność, ponieważ dla danego przeciwciała pierwotnego można stosować wiele różnych przeciwciał wtórnych i technik wykrywania.

.