Co to jest linia komórkowa?

Linia komórkowa to miejsce, w którym pewien typ komórek jest stale hodowany in vitro w celu ciągłej produkcji komórek, tak długo, jak długo dostarczane są im świeże media, na których mogą rosnąć.

Image Credits: Jens Goepfert / .com

Linia komórkowa różni się od normalnej kultury komórkowej, ponieważ komórki w linii komórkowej zostały unieśmiertelnione. Immortalizacja komórek polega na tym, że komórki w linii komórkowej są zmutowane w taki sposób, że dzielą się nieustannie i nie osiągają pewnego limitu wzrostu. Komórki w pierwotnej kulturze komórkowej, z drugiej strony, są pobierane bezpośrednio z tkanki i mają ustaloną długość życia.

Zalety linii komórkowej w porównaniu z pierwotną hodowlą komórkową:

• Zapewniają nieograniczone dostawy materiału komórkowego do badań
• Zawsze produkują komórki o tej samej czystości, więc wyniki są powtarzalne
• Oszczędne
• Łatwe w utrzymaniu

Dlaczego potrzebujemy linii komórkowych?

Utworzenie linii komórkowej jest niezwykle powszechną praktyką w badaniach z zakresu biologii komórkowej i molekularnej. Komórki te mogą być wykorzystywane do badania wielu różnych obszarów metabolizmu komórkowego i funkcji genów, jak również wykorzystywane do produkcji szczepionek, przeciwciał i niektórych leków.

Różne linie komórkowe są wykorzystywane do określonych celów. Na przykład, linie komórkowe HeLa są powszechnie używane do badania raka, komórki Human Embryonic Kidney (HEK) są często używane do badania ekspresji genów, a komórki jajnika chomika chińskiego (CHO) są często używane do inżynierii genetycznej lub do syntezy określonych produktów.

Co mogą zaoferować linie komórkowe znakowane reporterowo?

Linie komórkowe znakowane reporterowo, zwane również po prostu liniami komórkowymi reporterowymi, oferują różne zastosowania w porównaniu do normalnej linii komórkowej. Mogą być używane do wizualizacji i śledzenia ekspresji białek, czynników transkrypcyjnych lub innych cząsteczek, jak również potencjalnie śledzenia ich położenia w całych komórkach w czasie rzeczywistym. Pozwala to badaczom zapewnić, że ich linie komórkowe dokładnie reprezentują normalne zmiany metaboliczne, które zachodzą w naturalnych tkankach, a co ważniejsze, mogą określić, które geny są aktywnie wyrażane w komórce.

Jak działają linie komórkowe znakowane reporterowo?

Najczęstszym celem linii komórkowej znakowanej reporterowo jest pomiar ekspresji pewnych genów lub produkcja pewnych białek. Odbywa się to poprzez wprowadzenie genów reporterowych do linii komórkowej.

Różne geny mogą być używane jako geny reporterowe i są zwykle wybierane w oparciu o zakres mierzalnej aktywności. Na przykład, gen dla lucyferazy lub GFP (białko zielonej fluorescencji) jest często używany, ponieważ oba produkowane białka mogą być wyzwalane do wytwarzania mierzalnej fluorescencji. Fluorescencja ta może być mierzona za pomocą luminometru lub spektrofotometru.

Wybrany gen reportera jest wstawiany do wektora, obok specyficznego promotora genu, który jest badany, a używana linia komórkowa jest następnie transfekowana tym wektorem. Jeśli promotor jest aktywnie wyrażany w linii komórkowej, wtedy gen reporterowy będzie wyrażany, co może być zmierzone.

Jak ten system może być wykorzystany?

Ten system jest głównie oparty na pomiarze, czy specyficzne promotory są wyrażane, ale może to być wykorzystane do pomiaru aktywności różnych ścieżek biochemicznych, które mają sygnały downstream, które kończą się transkrypcją genów. Ustalenie, czy pewne geny ulegają ekspresji może również określić, czy linia komórkowa została zainfekowana wirusem, lub sugerować rozwój raka.

System ten jest zatem bardzo przydatny w badaniach różnych chorób, ponieważ daje łatwo interpretowalne wyniki, jak różne geny ulegają ekspresji w różnych warunkach.

Further Reading

• All Cell Labeling Content
• Nucleic Acid Labelling Overview
• Bioorthogonal Chemical Reporters
• Adipo-Clear
• DNA Labelling Using DAPI: Methodology

Cytaty

.