Biomolekularne interakcje są fundamentalne dla większości procesów komórkowych, a identyfikacja głównych oddziałujących składników jest zazwyczaj pierwszym krokiem w kierunku zrozumienia mechanizmów, które rządzą różnymi funkcjami komórki. Dlatego też, statystyczne analizy obrazu, które mogą być wykonywane na obrazach mikroskopii fluorescencyjnej utrwalonych lub żywych komórek są rutynowo stosowane w badaniach biofizycznych i biologicznych komórek. Podejścia te mierzą frakcję oddziałujących cząsteczek poprzez analizę dwukolorowych obrazów fluorescencyjnych pod kątem kolokalizacji pikseli. Algorytmy kolokalizacji okazały się skuteczne, chociaż zakres dynamiczny i dokładność tych pomiarów nigdy nie zostały dobrze ustalone. Przestrzenna spektroskopia korelacji krzyżowej obrazu (ICCS), która krzyżowo koreluje przestrzenne fluktuacje intensywności zarejestrowane w obrazach z dwóch kanałów detekcji jednocześnie, również okazała się być efektywną miarą kolokalizacji. Poprzez symulacje, obrazowanie fluorescencyjnych przeciwciał zaadsorbowanych na szkle i pomiary komórkowe pokazujemy, że ICCS działa znacznie lepiej niż standardowe algorytmy kolokalizacji przy umiarkowanych i wysokich gęstościach cząsteczek, które są często spotykane w systemach komórkowych. Co więcej, okazało się, że stosunek gęstości pomiędzy dwoma znakowanymi gatunkami odgrywa główną rolę w dokładności analizy kolokalizacji. Poprzez bezpośrednie i systematyczne porównanie standardowego algorytmu kolokalizacji w mikroskopii fluorescencyjnej z przestrzennym ICCS, pokazujemy obszary, w których każde z tych podejść ma zastosowanie, a co ważniejsze, w których nie dają one dokładnych wyników.