Abstract

Morinda citrifolia L. (noni) tem demonstrado tratar diferentes desordens. Entretanto, os dados relativos ao seu papel no tratamento da inflamação intestinal ainda necessitam de esclarecimento. No presente estudo, investigamos os efeitos do suco de fruta noni (NFJ) no tratamento de ratos C57BL/6, que foram continuamente expostos ao sulfato de sódio dextran (DSS) por 9 dias consecutivos. O consumo de NFJ não teve impacto sobre a redução dos sinais clínicos da doença ou sobre a perda de peso. No entanto, quando foi utilizada uma diluição de 1 : 10, a arquitetura intestinal dos ratos foi preservada, acompanhada por uma redução do infiltrado inflamatório. Independentemente da concentração da NFJ, observou-se também uma diminuição da actividade da mieloperoxidase e das principais citocinas inflamatórias, TNF-α e IFN-γ, no intestino. Além disso, quando a NFJ foi diluída 1 : 10 e 1 : 100, foi detectada uma redução na produção de óxido nítrico e IL-17 nos homogeneizados do intestino. Em geral, o tratamento com NFJ foi eficaz em diferentes aspectos associados à progressão e ao agravamento da doença. Estes resultados podem indicar que a noni fruta é uma importante fonte de moléculas anti-inflamatórias com grande potencial para inibir a progressão de doenças inflamatórias, como a doença inflamatória intestinal.

1. Introdução

As atividades antiinflamatórias potenciais de vários compostos naturais na desregulação de atores-chave no desenvolvimento da inflamação têm sido exploradas em diferentes cenários, incluindo a modulação de citocinas, fatores de transcrição, enzimas, e a produção de mediadores inflamatórios protéicos e não-proteicos. Essas atividades incluem a modulação de citocinas (por exemplo, IL-6, TNF-α, IFN-γ, IL-17 e IL-12), fatores de transcrição, enzimas (por exemplo, mieloperoxidase-MPO e ciclo-oxigenase COX-1 e COX-2) e também a produção de óxido nítrico (NO). Devido à sua importância no controle da inflamação, foram sugeridas terapias que visam tais moléculas como possíveis auxiliares na prevenção e/ou tratamento de doenças inflamatórias, como artrite reumatóide, dermatite e doença inflamatória intestinal (DII). As DII são doenças inflamatórias crônicas do trato gastrointestinal, que estão clinicamente presentes como uma das duas doenças, a doença de Crohn (DC) ou a colite ulcerativa (CU). Estas patologias são de especial interesse, uma vez que afectam milhões de pessoas em todo o mundo, e as terapias actuais ainda não são totalmente eficazes no controlo da progressão da doença ou na prevenção da ocorrência de efeitos secundários .

Morinda citrifolia L. (noni) pertence à família Rubiaceae, e é uma fonte de moléculas naturais que tem sido usada como planta medicinal pelos polinésios há mais de 2.000 anos . Até agora, vários compostos bioativos foram isolados de frutas noni, incluindo ácidos graxos, flavonóides, polissacarídeos e esteróis . O potencial anti-inflamatório dos compostos de noni frutas foi demonstrado em um modelo experimental de infecção por Helicobacter pylori no qual foram utilizados etanol e extratos de acetato de etila. Esses extratos foram capazes de reduzir tanto a quimiotaxia dos neutrófilos quanto a produção de óxido nítrico induzível (iNOS) e COX-2 . Assim, os ratos C57BL/6 tratados oralmente com suco de fruta noni a 500 mg kg-1 dia-1 durante 60 dias apresentaram redução do infiltrado inflamatório e expressão de citocinas para IL-12, TNF-α, TGF-β e IL-10, no rodapé infectado com Leishmania amazonensis . É importante mencionar que citocinas como a IL-12, IL-6, TNF-α, IFN-γ, IL-17 e IL-23 estão associadas ao desenvolvimento e ao agravamento da DII, pelo que foram abordadas de forma diferente para tratar esta doença inflamatória . Além disso, o potencial anti-inflamatório do extrato de folhas de Morinda citrifolia foi demonstrado pela redução dos níveis de TNF-α, IL-1β e NO em macrófagos após estimulação com lipopolissacarídeo (LPS) . Ainda que o papel dos compostos de não-i frutas no controle dos agentes inflamatórios seja de especial relevância, seus efeitos no desenvolvimento da inflamação intestinal ainda são pouco explorados.

Por isso, este estudo mostrou os efeitos do suco de noni fruta na interação de citocinas e arquitetura intestinal em um modelo murino de colite induzida por dextrano sulfato de sódio como mecanismos subjacentes para sua atividade imunomoduladora.

2. Materiais e Métodos

2.1. Coleta e Identificação Botânica da Planta

Os frutos utilizados neste estudo foram obtidos da monocultura de 150 plantas não i na Fazenda Boa Vontade, uma fazenda no município de Araguari, Triângulo Mineiro/MG, Brasil, nas coordenadas 18°43′47.23′′S, 48°6′49.50′′O (dados do Google Earth, 2013). Todos os espécimes foram preparados de acordo com técnicas convencionais de herborização e depositados no herbário da Universidade Federal de Uberlândia (HUFU Herbarium) sob o número de registro HUFU-67210, como Morinda citrifolia L. (Rubiaceae).

2.2. Processo de extração de suco

Sumo de Morinda citrifolia (noni) foi preparado no Laboratório de Farmacognosia da Universidade de Uberaba, em Uberaba, Minas Gerais, Brasil. A fruta de M. citrifolia foi coletada manualmente e aleatoriamente de 150 plantas, lavada em água ozonizada, e mantida à temperatura ambiente por 3-5 dias. Os frutos foram despulpados mecanicamente utilizando um despulpador de frutas e, após a remoção da semente, a polpa resultante foi centrifugada a 4.000 rpm sob refrigeração até que os sobrenadantes estivessem livres, sendo então considerada 100% (v/v) de suco e armazenada a -70°C até o uso posterior.

2,3. Estudos Animais

Ratos machos C57BL/6 com 6-8 semanas de idade e pesando 20-25 g foram alojados em condições ambientais específicas, livres de patógenos e com controle padrão, a temperatura constante (25°C), em um ciclo luz/escuro de 12 horas, com acesso ad libitum a alimentos e água, no alojamento animal da Universidade Federal do Triângulo Mineiro (UFTM), Brasil. Todos os estudos com animais foram realizados de acordo com o Comitê Institucional de Cuidados e Uso de Animais da UFTM sob o protocolo 275. Os experimentos foram realizados com 8 ratos/grupos, a saber: ratos salinos, ratos de controle saudáveis tratados com solução salina; DSS 2,5%, ratos expostos ao sulfato de sódio dextran (DSS); DSS 2,5% + noni puro, ratos expostos ao DSS e tratados com suco de fruta noni puro; DSS 2.5% + noni 1 : 10, ratos expostos ao DSS e tratados com uma diluição 1 : 10 de suco de fruta noni; e DSS 2,5% + noni 1 : 100, ratos expostos ao DSS e tratados com uma diluição 1 : 100 de suco de fruta noni. Um volume de 100 μl por rato foi administrado oralmente durante 9 dias consecutivos.

2,4. Colite induzida por DSS e avaliação clínica

Colite foi induzida por 2,5% de DSS (MP Biomedicals, Illkirch, França, Peso molecular: 36.000-50.000 kDa) continuamente adicionado à água potável por 9 dias consecutivos para coleta de amostras. Além de registrar a ingestão diária de alimentos e água, também foram avaliadas diariamente as alterações de peso corporal e os sinais clínicos de doença, a fim de obter uma pontuação clínica de doença para cada rato. Cada sinal apresentado pelos animais correspondia a um ponto, e a soma de pontos para cada rato definia uma pontuação clínica. A pontuação clínica foi determinada conforme descrito anteriormente .

2,5. Eutanásia e coleta de amostras

Os ratos foram eutanizados no dia 9, e o cólon foi removido para análise posterior. As amostras de cólon foram divididas em seções menores que foram imersas em PBS/10% formaldeído para incorporação de parafina ou foram imediatamente congeladas em nitrogênio líquido para quantificação da atividade da mieloperoxidase (MPO) ou óxido nítrico (NO) por ensaios enzimáticos. Além disso, uma seção intestinal de cada rato foi coletada em uma solução contendo inibidores de protease (Complete®, Roche Pharmaceuticals, Mannheim, Alemanha) para quantificação de citocinas por imunoensaio enzimático (ELISA).

2,6. Mieloperoxidase (MPO) e óxido nítrico (NO)

Briefly, para o ensaio de MPO, os cortes foram homogeneizados e os eritrócitos foram lisados. O pellet obtido após a centrifugação foi ressuspenso, seguido de três ciclos de congelamento e descongelamento. Após a centrifugação, o sobrenadante foi colocado em placas de 96 poços e revelado com substrato de tetrametrametilbenzidina (TMB) (BD OptEIA™, San Diego, CA) a 37°C. A reação foi interrompida e as leituras foram realizadas em um espectrofotômetro a 450 nm. A atividade da MPO foi determinada conforme descrito anteriormente. Os resultados foram normalizados para o peso seco de cada secção intestinal e expressos como densidade óptica por grama de tecido (nm/g de tecido).

Para a medição do NO, o nitrito acumulado nos homogeneizados intestinais foi medido como indicador da produção de NO usando a reacção de Griess . Em seguida, 100 μL de homogeneizado tecidual foi misturado com 100 μL de reagente Griess, que é composto por volumes iguais de 1% (p/v) de sulfanilamida em ácido fosfórico a 5% (v/v), e 0,1% (p/v) de naftil-etilenodiamina-HCl, e incubado à temperatura ambiente durante 10 min. A absorvância foi medida a 540 nm em um leitor de placa de 96 poços (Perkin Elmer Cetus, CA, EUA). A quantidade de nitrito nas amostras foi calculada usando a análise de regressão linear da absorvância da diluição em série da curva padrão de nitrito de sódio. Os resultados foram normalizados para o peso seco de cada secção intestinal e expressos como picograma por mililitro por grama de tecido (pg/ml/g).

2,7. Quantificação de citocinas pelo ELISA

Citocinas IL-10, IL-17, IFN-γ, TNF-α, IL-12, IL-4 e IL-23 foram quantificadas em homogeneização de tecidos pelo ELISA de acordo com as instruções do fabricante (BD Biosciences, San Jose, CA, EUA). Os resultados foram normalizados ao peso seco de cada secção intestinal e expressos como nanograma por mililitro por grama de tecido (ng/mL/g de tecido).

2,8. Histologia e Análise Histopatológica

Para avaliar os danos microscópicos, os cortes intestinais foram cortados longitudinalmente, lavados com PBS, fixados em formalina tamponada a 10% durante 24 h e, em seguida, processados para incorporação de parafina, seguida de secção de micrótomo. Os cortes teciduais (5 μm) foram obtidos e corados com hematoxilina e eosina (H&E). Para análise histopatológica, foram avaliadas a mucosa, submucosa, camadas musculares e serosa. Esses cortes intestinais também foram avaliados quanto à presença de edema, infiltrado inflamatório e anormalidades epiteliais.

Imagens foram capturadas com uma câmera de vídeo digital (Evolution MP 5.0 color Media Cybernetics, Silver Spring, MD, EUA), com uma objetiva de 10x, acoplada a um microscópio de luz (Nikon Eclipse 50i, Melville, NY, EUA). A morfometria foi realizada utilizando o Image-Pro Insight (Media Cybernetics). O infiltrado inflamatório foi medido com base na área danificada contendo o infiltrado inflamatório dividido pela área total de tecido visualizado na imagem adquirida e expresso como porcentagem (%). Um patologista treinado e cego para o tratamento realizou a análise histopatológica.

2,9. Análise de dados e estatística

Distribuição normal e variância homogênea foram testadas para todas as variáveis. Quando a distribuição foi considerada normal e a variância homogênea, foram utilizados testes paramétricos: teste não pareado de Student ou ANOVA unidirecional seguido pelo teste pós-hoc de Tukey. Nos casos de distribuição não gaussiana dos dados, foram utilizados os seguintes testes não paramétricos: teste de Mann-Whitney ou teste de Kruskal-Wallis acompanhado pelo teste pós-hoc de Dunn. Os resultados foram expressos como média ± DP. As diferenças observadas foram consideradas significativas quando (5%). A análise estatística foi realizada utilizando GraphPad Prism, versão 5.0 (La Jolla, CA, EUA).

3. Resultados

3.1. Tratamento com suco de fruta noni e resultado da doença

Primeiro, para avaliar se o suco de fruta noni foi capaz de prevenir a perda de peso e o resultado da colite induzida por DSS, os ratos foram expostos a DSS por 9 dias e depois tratados com o suco de fruta, como descrito em Materiais e Métodos. O grupo do suco de fruta noni não pareceu reduzir a perda de peso quando comparado com seus pares de controle (DSS 2,5%) (Figura 1(a)). Além disso, independentemente da concentração utilizada, não houve efeito na apresentação de sinais clínicos de doença nos ratos tratados com suco de fruta noni em relação aos ratos não tratados (Figura 1(b)).

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3,2. O consumo de suco de fruta noni inibe a inflamação e preserva a arquitetura intestinal em um modo dose-dependente

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Após isso, como não foram observados efeitos macroscópicos após o tratamento com suco de fruta noni, objetivamos determinar se o consumo de suco de fruta teve algum efeito microscópico na arquitetura intestinal. Foi observado, de forma dose-dependente, que o grupo tratado com suco de fruta noni foi capaz de preservar sua arquitetura intestinal. Ratos saudáveis (Figura 2(a)) tiveram a superfície do epitélio preservada, criptas rectilíneas, compostas pelo número habitual de células da taça. Na lâmina própria, foi visualizado o habitual infiltrado mononuclear. Os músculos submucosos, musculares e serosos apresentavam arquitetura normal. Os ratos expostos ao SFA apresentavam erosões na superfície do epitélio intestinal e ausência de criptas (Tabela 1). A lâmina própria apresentava edema moderado e infiltrado celular mononuclear (Figura 2(b), seta), a submucosa apresentava infiltrado mononuclear moderado e edema grave (Figura 2(b), seta), e a camada muscular era ligeiramente espessada, com atividade de colite. Em ratos expostos ao SFA e tratados com suco noni puro, as irregularidades da cripta eram escassas e leves (Tabela 1), e a lâmina propria apresentava edema moderado (Figura 2(c), seta) e infiltrado mononuclear (Figura 2(c), ponta de seta); entretanto, apenas um infiltrado mononuclear leve e edema moderado foram detectados na camada submucosa, e a camada muscular estava levemente espessada. Por outro lado, em ratos tratados com suco de fruta noni diluído 1 : 10, as criptas tiveram suas irregularidades preservadas (Figura 2(d), asterisco), a lâmina propria mostrou tanto edema moderado (Figura 2(d), seta) como infiltrado mononuclear (Figura 2(d), ponta de seta), e a submucosa teve apenas um leve infiltrado mononuclear e edema moderado (Tabela 1). Nos ratos tratados com suco de fruta noni diluído 1 : 100, as criptas eram irregulares e atróficas (Figura 2(e), asterisco), a lâmina propria apresentava edema moderado e infiltrado mononuclear e a camada submucosa apresentava infiltrado mononuclear leve e edema moderado (Tabela 1). Em geral, a arquitetura das criptas intestinais foi preservada nos ratos tratados com suco de noni, e foi mais preservada nos ratos que receberam suco de noni a 1 : 10 e 1 : 100 diluições em comparação com aqueles tratados com noni puro ou DSS.

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A produção de NO foi reduzida nos ratos tratados com suco de fruta noni diluído 1 : 10 e 1 : 100 em relação aos que receberam noni ou DSS puro (Figura 3(a)). Além disso, independentemente da concentração utilizada, os camundongos tratados com suco de noni tiveram atividade reduzida da MPO (Figura 3(b)) em comparação com os camundongos expostos ao DSS. Embora a perda de peso e o resultado da doença não tenham sido afetados pelo consumo de noni fruit, a melhora da arquitetura intestinal e a redução da atividade das enzimas responsáveis pela inflamação foram associadas ao consumo de suco de fruta de forma dose-dependente.

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Figura 3

O consumo de suco de fruta Noni inibe a inflamação reduzindo as atividades de óxido nítrico e mieloperoxidase. Ratos C57BL/6 foram expostos a 2,5% de sulfato de sódio dextran (DSS) e tratados diariamente com suco de fruta noni. No 9º dia, os camundongos foram eutanizados a fim de se obterem cortes intestinais. Quantificação da produção intestinal de óxido nítrico (a) e mieloperoxidase (MPO), expressa como picograma por mililitro por grama de tecido (pg/ml/g) e como densidade óptica por grama de tecido (nm/g de tecido), respectivamente. Os dados são representados como média ± SEM. .

3.3. Consumo de suco de noni frutas reduz citocinas chave inflamatórias no intestino em um modo dose-dependente

Finalmente, objetivamos avaliar se a melhoria na arquitetura intestinal também poderia estar associada à modulação de citocinas chave associadas ao agravamento/proteção de doenças. Camundongos tratados com suco de fruta noni, independentemente da concentração utilizada, apresentaram redução da produção de citocinas inflamatórias TNF-α e IFN-γ (Figuras 4(a) e 4(c), resp.). Uma redução da IL-17, outra citocina chave associada ao agravamento da doença, foi observada apenas em ratos tratados com diluições 1 : 10 e 1 : 100 (Figura 4(e)). Entretanto, não houve diferenças na produção de IL-12 (Figura 4(b)), IL-4 (Figura 4(d)), IL-23 (Figura 4(f)) e IL-10 (Figura 4(g)). Em conjunto, esses resultados sugerem que a melhoria da arquitetura intestinal também pode estar associada à redução local de citocinas inflamatórias chave.

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Figura 4

Noni consumo de suco de fruta reduz as citocinas inflamatórias chave no intestino em uma dose…de forma dependente. Os ratos C57BL/6 foram expostos a 2,5% de sulfato de sódio dextran (DSS) e tratados diariamente com suco de fruta noni. O ensaio de imunoabsorção enzimática (ELISA) foi realizado em homogenatos intestinais. (a) TNF-α, (b) IL-12, (c) IFN-γ, (d) IL-17, (e) IL-23, (f) IL-4, e (g) IL-10. Os resultados foram expressos em nanogramas de citocinas por mililitro de tecido (ng/ml/g de tecido), normalizados pelo peso seco do tecido. Os dados são representados como média ± SEM. .

4. Discussão

Os resultados aqui apresentados demonstram que o suco de fruta noni pode reduzir as citocinas inflamatórias chave envolvidas no desenvolvimento da inflamação intestinal. Além disso, o tratamento com suco de fruta também demonstrou ser capaz de melhorar a arquitetura intestinal, principalmente quando a diluição 1 : 10 foi utilizada. Entretanto, pelo menos aparentemente, não foram detectados efeitos na apresentação de sinais clínicos de doença.

As propriedades benéficas do tratamento com suco de fruta noni no controle da colite foram parcialmente atribuídas a uma melhora na arquitetura intestinal, juntamente com uma redução no infiltrado inflamatório. Este cenário foi seguido por uma diminuição na atividade do NO (somente quando o suco de noni foi diluído 1 : 10 e 1 : 100) e MPO (em qualquer concentração). O NO é um forte mediador pró-inflamatório derivado principalmente da óxido nítrico sintase induzível (iNOS) após estimulação com endotoxinas bacterianas e citocinas inflamatórias como IL-1β, TNF-α e IFN-γ, em diferentes tipos de células, incluindo macrófagos, neutrófilos, células endoteliais e células musculares lisas. A superexpressão da iNOS, especialmente em sítios mucosos, como o trato gastrointestinal, é relatada como associada ao desenvolvimento de doenças inflamatórias, incluindo a DII . Neste contexto, a produção de altos níveis de NO por células infiltrantes, tais como macrófagos, neutrófilos e linfócitos, bem como por células epiteliais do cólon, foi descrita como diretamente associada a danos nos tecidos locais e agravamento da doença na DII . Esta observação foi reforçada pelo fato de que a superexpressão da iNOS induzida pelas citocinas inflamatórias IL-1β, TNF-α, IFN-γ, IL-6, IL-17 e IL-23 foi encontrada no plasma, nas células mononucleares da lâmina própria e nas células epiteliais do cólon de pacientes com DII e camundongos com inflamação intestinal, reforçando assim o papel dos derivados da iNOS, como NO, e das citocinas inflamatórias, no agravamento e desfecho da doença. Portanto, parece razoável acreditar que terapias que visam modular tais aspectos podem representar uma ferramenta importante para restringir a inflamação e a progressão da doença. Neste contexto, a monotropeína isolada das raízes de Morinda officinalis, um membro da família Rubiaceae como M. citrifolia, reduziu a produção in vitro de NO em macrófagos murinos após estimulação com LPS de forma dose-dependente. Uma correlação positiva entre o NO e a gravidade da DII foi proposta em estudos clínicos descrevendo a ocorrência de altos níveis de nitrito/nitrato no plasma, urina e lúmen de pacientes com DII . Shin et al. também demonstraram a atividade da monotropeína quando ratos foram expostos a 4% de DSS por 9 dias consecutivos. Neste caso, o tratamento foi capaz de reduzir a atividade dos jogadores inflamatórios COX-2 e MPO . O estudo da atividade da MPO é um marcador crítico da infiltração dos neutrófilos na mucosa intestinal. De fato, estudos utilizando diferentes protocolos para induzir colite têm demonstrado uma correlação positiva entre a determinação da atividade da MPO e a gravidade da doença . Embora as expressões de COX-2 e iNOS não tenham sido determinadas em nosso estudo, estes resultados sugerem que diferentes membros da família Rubiaceae podem modular a inflamação de forma semelhante, inibindo assim a progressão e gravidade da colite induzida por DSS, utilizando mecanismos análogos. A capacidade de modular os principais componentes inflamatórios por meio de terapias visando controlar a atividade de diferentes tipos celulares, como os macrófagos, além de reduzir a produção de citocinas e NO, como a observada em nosso estudo quando a NFJ foi utilizada, representa uma abordagem promissora para restringir a progressão da inflamação na DII. O controle da inflamação por esses mecanismos pode explicar a manutenção da arquitetura intestinal observada em nosso estudo quando foram utilizadas as diluições 1 : 10 e 1 : 100.

Os mecanismos complexos e heterogêneos associados ao desenvolvimento da inflamação intestinal incluem a genética do hospedeiro, gatilhos ambientais e distúrbios tanto na composição da microbiota quanto no equilíbrio imunológico . A gravidade da inflamação intestinal está associada ao aumento da produção de citocinas pró-inflamatórias (por exemplo, TNF-α, IFN-γ, IL-6, IL-17 e IL-23), o que torna as terapias que visam reduzir os níveis dessas citocinas relevantes. Em nosso estudo, o tratamento com suco de fruta noni, de forma dose-dependente, foi capaz de reduzir a produção de TNF-α, IFN-γ e IL-17 no intestino.

TNF-α é um dos atores centrais no desenvolvimento da inflamação intestinal, e está aumentada na mucosa intestinal dos pacientes com DII . Esta citocina também tem um papel fundamental na produção de NO, e aumenta a produção de metaloproteinase, que contribui para a perda da integridade epitelial e para o agravamento da doença. Os efeitos da TNF-α são mediados por dois receptores, o receptor TNF-1 (TNFR-1) e o receptor TNF-2 (TNFR-2). O primeiro pode ser expresso em células imunes ou não imunes, resultando na ativação de NF-κB, citotoxicidade e produção de citoquinas inflamatórias. Em nosso estudo, o tratamento com suco de fruta noni reduziu consideravelmente a produção de TNF-α no intestino, independentemente da diluição utilizada. Essa modulação poderia ser, pelo menos parcialmente, atribuída à inibição da NF-κB pelo ácido ascórbico e pelo glicosídeo flavonóide, que foram isolados do suco de fruta noni fermentado. Entretanto, é possível especular que essas moléculas possam reduzir os níveis de TNF-α no intestino através da desregulação da TNFR-1. De fato, devido à importância desta citocina no desenvolvimento e agravamento da DII, terapias visando visar a TNF-α para prevenir o desenvolvimento de inflamação intestinal poderiam ser úteis. A administração de anticorpos monoclonais contra IL-6 e TNF-α foi capaz de reduzir a gravidade da doença e atenuar a inflamação intestinal na colite induzida por DSS. No entanto, um número substancial de pacientes perde capacidade de resposta, especialmente devido à produção de anticorpos antidroga e liberação acelerada de medicamentos, o que reforça a necessidade de novas abordagens terapêuticas com o objetivo de controlar melhor a progressão da DII e reduzir os efeitos colaterais.

IFN-γ é uma citocina pró-inflamatória produzida por uma ampla gama de células, incluindo células T helper (células CD4+T) e células T citotóxicas (células CD8+T), células naturais killer e células linfóides inatas do grupo 1. Uma maior frequência de células CD4+T e células CD8+T que produzem IFN-γ foi mostrada em pacientes com DII em comparação com suas contrapartes de controle . Tanto IFN-γ como TNF-α estão aumentados na mucosa dos pacientes com DII e agem sinergicamente contribuindo para o desenvolvimento e manutenção da inflamação que culmina com a quebra da barreira . Estas citocinas mostraram perturbar as proteínas da junção intercelular sob condições inflamatórias, que não são observadas em áreas não inflamadas de tecido insalubre . Alguns dos mecanismos subjacentes a estes distúrbios incluem apoptose epitelial e transcrição reduzida de proteínas de justa função . Portanto, terapias que visam reduzir esta citocina podem ser úteis no controle da inflamação e na melhoria dos resultados da doença. Neste contexto, um tratamento com glicocorticóides a curto prazo de camundongos expostos ao DSS por seis dias foi capaz de reduzir a frequência de células CD4+ produtoras de IFN-γ no baço e diminuir a expressão desta citocina e IL-1β no intestino. Esta redução na atividade do IFN-γ foi seguida por uma melhora no resultado clínico e restauração do equilíbrio imunológico. Além disso, os efeitos benéficos associados à redução de citocinas inflamatórias como a IL-1β e a IFN-γ foram ainda mais elucidados em um modelo murino de colite. Neste caso, a colite foi induzida pela administração intracolônica de ácido dinitrobenzeno sulfônico (DNBS), e ratos foram tratados usando um canabinóide não psicotrópico, conhecido como canabigerol . Embora os efeitos do tratamento com suco de fruta noni na apoptose e permeabilidade intestinal não tenham sido investigados neste estudo, a melhoria da arquitetura intestinal e a redução do infiltrado inflamatório poderiam ser parcialmente atribuídos à redução da IFN-γ.

células produtoras de DI-17 estão envolvidas na patogênese de numerosas doenças inflamatórias e auto-imunes, e demonstraram mediar a patogênese da doença na DII. O papel das células Th17 na patogênese da DII foi principalmente atribuído a uma mutação no gene da IL-23R, que foi identificada em pacientes com DII e que regula a produção de citocinas relacionadas ao Th17 . De fato, já havia sido demonstrado um aumento da produção de IL-17 por células da lâmina própria tanto na UC como na DC. Além disso, foi constatado que as citocinas produzidas por células Th17, como IL-17 e IL-21, upregulam a expressão de TNF-α, IL-1β, IL-6 e IL-8 e o recrutamento de neutrófilos, o que pode contribuir para o agravamento da DII. Além do papel clássico dos linfócitos Th17 na patogênese da DII, as células linfóides inatas do grupo 3 também têm sido implicadas na produção de IL-17 e na patogênese da doença, tanto em modelos experimentais quanto em seres humanos. Em nosso estudo, foram detectados níveis reduzidos de IL-17 no cólon de camundongos tratados com suco de fruta noni, mas apenas quando foram utilizadas as diluições 1 : 10 e 1 : 100. Embora não tenhamos identificado se a redução de IL-17 no intestino estava mais associada à imunidade inata ou adaptativa, ou a ambas, não podemos subestimar a importância das terapias que visam produzir essas citocinas para inibir a inflamação na colite.

Overall, nossos dados mostraram que o tratamento com suco de noni desempenha um papel importante na inibição da inflamação durante o desenvolvimento da colite experimental. Um dos principais aspectos relativos ao uso do suco de fruta como opção terapêutica diz respeito ao seu efeito imunomodulador, o que tem um conseqüente impacto na melhoria da arquitetura intestinal. No entanto, estudos adicionais devem ser realizados a fim de elucidar as moléculas subjacentes à redução de citocinas inflamatórias neste modelo.

Interesses Concorrentes

Os autores declaram não haver conflito de interesses.

Avalores

Este estudo foi apoiado pela Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais (FAPEMIG), Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) e Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq, 150075/2016-2).