O que é uma linha de células?

Uma linha de células é onde um determinado tipo de célula é permanentemente cultivada in vitro para produzir células continuamente, desde que sejam fornecidas com meios frescos para crescer.

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Uma linha de células é diferente de uma cultura de células normal porque as células dentro de uma linha de células foram imortalizadas. A imortalização celular é onde as células de uma linha de células são mutadas de uma forma que as faz dividirem-se continuamente e não alcançarem um certo limite de crescimento. As células dentro de uma cultura de células primárias, por outro lado, são amostradas diretamente do tecido e têm um tempo de vida definido.

Vantagens de uma linha de células em comparação com a cultura primária:

• Prover um fornecimento ilimitado de material celular para estudo
• Produzir sempre a mesma pureza de células para que os resultados sejam reprodutíveis
• Custo efetivo
• Fácil de manter

Por que precisamos de linhas de células?

A criação de uma linha de células é uma prática extremamente comum dentro da pesquisa de biologia celular e molecular. Estas células podem ser usadas para estudar uma infinidade de diferentes áreas do metabolismo celular e função gênica, bem como ser usadas para fabricar vacinas, anticorpos e certos medicamentos.

Diferentes linhas celulares são usadas para fins específicos. Por exemplo, as linhas celulares HeLa são comumente usadas para estudar o câncer, as células do rim embrionário humano (HEK) são frequentemente usadas para estudar a expressão gênica, e as células do hamster ovariano chinês (CHO) são frequentemente usadas para engenharia genética ou para a síntese de produtos específicos.

O que as linhas celulares com rótulo de repórter oferecem?

Linhas celulares com rótulo de repórter, também chamadas simplesmente de linhas celulares de repórter, oferecem aplicações diferentes em comparação com uma linha celular normal. Elas podem ser usadas para visualizar e rastrear a expressão de proteínas, fatores de transcrição ou outras moléculas, bem como rastrear potencialmente onde elas estão dentro de células inteiras em tempo real. Isto permite aos pesquisadores assegurar que suas linhas de células estejam representando com precisão as mudanças metabólicas normais que ocorrem dentro dos tecidos naturais e, mais importante, pode determinar quais genes estão sendo ativamente expressos dentro de uma célula.

Como funcionam as linhas de células rotuladas como repórteres?

O objetivo mais comum de uma linha de células repórteres é medir a expressão de certos genes, ou para a produção de certas proteínas. Isto é feito através da introdução de genes declarantes em uma linha celular.

Vários genes podem ser usados como genes declarantes, e são normalmente escolhidos com base na extensão da atividade mensurável. Por exemplo, o gene para luciferase ou GFP (proteína fluorescente verde) é frequentemente utilizado, uma vez que ambas as proteínas produzidas podem ser desencadeadas para produzir uma fluorescência mensurável. Esta fluorescência pode ser medida com um luminômetro ou espectrofotômetro.

O gene repórter escolhido é inserido em um vetor, junto a um promotor genético específico que está sendo estudado, e a linha celular que está sendo usada é então transfectada com este vetor. Se o promotor estiver sendo ativamente expresso dentro da linha celular, então o gene repórter será expresso, o que pode ser medido.

Como este sistema pode ser utilizado?

Este sistema é baseado principalmente na medição se promotores específicos estão sendo expressos, mas isto pode ser usado para medir a atividade de várias vias bioquímicas que têm sinais a jusante que terminam com a transcrição de genes. Determinar se certos genes estão sendo expressos também pode determinar se uma linha celular foi infectada por um vírus, ou sugerir o desenvolvimento de câncer.

Este sistema é, portanto, muito útil no estudo de diferentes doenças, pois produz resultados facilmente interpretáveis para a forma como diferentes genes são expressos sob diferentes condições.

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