V. Károlynak egy másik portrét kellett találnia, Ausztriából azt, amelyet Portugál Izabella halála előtt küldött Margretnek. A nővére küldte a portrét novemberben Károly nagyon csalódott volt, hogy nem úgy nézett ki, mint a felesége. Mivel elégedetlen volt a portréval, meg kellett kérnie Tiziánt, hogy találjon egy olyan művet, amely hasonlít a feleségére.

Titian 1545-ben festette Izabella portréját, Tiziano berendezte, és Károly felesége fekete ruhában volt, ölében virágokat tartott, mögötte pompás korona volt. Az El Pardo palotában ez a művészet tűzvészben elpusztult, ez a történet nyomtatásban és több másolatban is megtalálható. A portré elvesztette az orrát, ezért Károly elvitte Augsburgba, hogy a művész dolgozzon rajta, hogy újrafesse az orrát. 1548 szeptemberében a művész a régi modellt használta a jelenlegi modell elkészítéséhez, és azt is Augsburgban festették meg. Károlynak és Izabellának volt egy közös portréja és egy másolata a madridi Fundacion Casa de Alba gyűjteményben ez volt a legjobb és az első kombináció Portugáliai Izabelláról és V. Károlyról.

Tiziano művészete emlékeket idézett Portugáliai Izabelláról, és az, amelyen mindketten rajta voltak, Károlyt a feleségére emlékeztette. Károly kérte a művészeteket, és nem pontos festményeket akart, hanem azt akarta vizualizálni, ami a fejében volt. Károly azt akarta, hogy Tiziano fesse meg az elveszett orrú portrét, mert ő úgy tudta megfesteni, ahogy az orr látszott. Az életében készült portrék valóságosnak tűntek, azt mutatták, hogy Portugál Izabellának aquilinus orra volt, ez egy olyan egyedi vonás volt, amelyet sokan észrevettek. Tizianusnak ugyanezt a korrekciót kellett elvégeznie a klasszikus egyenes orrról az ívelt orrra, amely Portugál Izabellának volt. A portrékon szereplő apróságok, amelyek Izabella emlékét idézték fel, arra késztették Károlyt, hogy közel tartsa a művészeteket, és mindezt olyan dokumentumokban őrzik, mint a Yuste és a Brüsszel, ahol az utóbbit 1556-ban, az előbbit pedig 1558-ban dokumentálták.

A portrék, amelyeket Tiziano készített, közel álltak Giulio Romano portréihoz. Az egyik Eleonora Gonzaga egy urbinói hercegnő, amit Tiziano nézett, és használta a készségek a festmények, hogy Izabella portrékat. A portugál Izabella képei valahogy kihívást jelentettek, mivel nem a valóságot ábrázolták, hanem csak az emlékeket akarták felidézni. Isabella Portugália portrék voltak nagyszerű munkát végzett Tiziano azonban, ha jobban megnézte azt mutatta, hogy a vászon használt korábban egy művészet egy nő. A vászonra festett Portugál Izabellát Mária, II. Fülöp húga kapta. Descalzas Reales nevű kolostor számára készült. 1636-ban került Madridba, az Alcazarba, ahol ugyanezekig az évekig maradt, amíg 1734-ben tűzvész nem pusztított.