ESETISMERTETÉS

Egy 5 éves fiúnál 1994 decemberében akut lymphoblastos leukémiát diagnosztizáltak, és bevonták a Fralle 93 protokollba. A gyermek 6 héttel az indukciós kemoterápia megkezdése után hematológiai remissziót ért el. Járóbetegként kezelték, és a következő években jól reagált a kezelésre. Egy 1997. márciusi konzultáció alkalmával azonban a betegnek lázas epizódja volt, amikor a Port-a-cath rendszerrel perfundálták. A klinikai vizsgálat nem mutatott szeptikus lokalizációt. A leukocitaszám 10 860/ml, az abszolút neutrofilszám 8 850/ml volt. A Port-a-cath-ból egy vértenyésztési sorozatot vettek, és az aerob palacktenyészetben gram-pozitív coryneform pálcikák sárga-pigmentált kolóniáit találták. A fiú egyszer intravénásan ceftriaxont (1 g), majd 7 napon át naponta kétszer 500 mg cefadroxilt kapott. A tartós láz miatt a cefadroxilt még egy hétig adták, és az immunszuppresszív gyógyszereket ugyanebben az időszakban abbahagyták. A beteg kórelőzménye a következő 2 hónapban nem volt említésre méltó, és a havi vizitek alkalmával nem végeztek vértenyésztést. 1997 júniusában a gyermek konzultációra jelentkezett, mivel lázas volt és fáradékonyságra panaszkodott. A fizikális vizsgálat nem mutatott fertőzési fókuszt, és a leukocitaszám nem volt emelkedett. A Port-a-katéterből egy sorozat vértenyészetet vettek, és az aerob fiolán ugyanazokat a gram-pozitív coryneform pálcikákat mutatták ki, amelyeket később Microbacterium sp-ként azonosítottak. Ampicillint (100 mg/kg/nap) adtak intravénásan perioperatívan, az első adagot 24 órával a műtét előtt. A beteg klinikai állapota ezt követően gyorsan javult. A Port-a-katétert Columbia véragaron tenyésztették. A 37 °C-on 24 órán belül egy nem fermentatív, gram-pozitív, kissé elszíneződött rúd sárga-pigmentált kolóniáiból álló tiszta tenyészet alakult ki. Sajnos a szubkultúrák elvesztek, és további vizsgálatokat nem lehetett végezni.

A beteg vértenyészetéből izolált, CF36 jelzésű törzs egy sárgapigmentált, mozgékony coryneform volt, oxidatív anyagcserével, proteolitikus aktivitással és elágazó típusú sejtzsírsavakkal. Ezek az általános jellemzők a Microbacterium nemzetségre utalnak, amelybe fermentatív és oxidatív fajok egyaránt tartoznak, ez utóbbiakat korábban Aureobacteriumnak nevezték (13).

A 16S rRNS-gén (rDNS) szekvenciáját egy primercsoport felhasználásával vizsgálták az amplifikációhoz. A PCR-termékeket agarózgélről QIAquick gél extrakciós készlettel (Qiagen, Westburg, Hollandia) tisztítottuk. A szekvenciaelemzést egy 3100 automatikus DNS-szekvenálóval (Perkin-Elmer Applied Biosystems, Foster City, Calif.) végeztük az ABI Prism Big Dye Terminator Cycle Sequencing Ready Reaction kit használatával. Az egyes szekvenciákat BLAST (10) segítségével hasonlítottuk össze az adatbázisokban elérhető szekvenciaadatokkal. A filogenetikai fát a szomszéd-összekötő módszerrel (8, 11) építettük fel.

A CF36 törzs 1490 nukleotidon alapuló 16S rDNS-szekvenálása a M. luteolum DSM 20143T és a M. oxydans DSM 20578T szekvenciájával mutatta ki a legnagyobb, 99,5%-os hasonlósági szintet. Szintén szoros rokonságban állt a M. saperdae (99,2%) és a M. liquefaciens (99,1%) szekvenciáival (1. táblázat).1). Négy másik hasonló törzset gyűjtöttek más betegektől származó különböző mintákból, amelyeket egy vértenyészetből izolált CF7, egy bronchiális aspirátumból származó CF34, egy vértenyészetből származó CF130 és egy ismeretlen emberi forrásból származó CF40 jelöléssel jelöltek. Egy további törzset, a CF128-at egy növényi mintából nyerték. Az öt törzs a M. oxydans típustörzséhez hasonló 16S rDNS-szekvenciákat mutatott, amelyek hasonlósága 99,3 és 99,4% között mozgott, míg a CF36-hoz való hasonlóságuk 99,9 és 100% között volt. Kilenc másik klinikai izolátum 99,9 és 100% közötti hasonlóságot mutatott a M. oxydans típustörzzsel.

Az eredmények arra ösztönöztek bennünket, hogy a következő hat törzs átfogó vizsgálatát végezzük el: CF36, CF7, CF34, CF40, CF128 és CF130.

A korábban leírt módon (14) meghatározott sejtzsírsavak minden törzsben ugyanazt a profilt mutatták. A fő celluláris zsírsavak átlagos százalékos aránya a következő volt: 40,3% anteiso-C15:0 (tartomány, 37,1-46,0%), 27% anteiso-C17:0 (tartomány, 22,9-31,3%), 15,7% iso-C16:0 (tartomány, 13,8-19,3%), 9,3% iso-C15:0 (tartomány, 4,6-13,9%) és 4,2% iso-C17:0 (tartomány, 3,0-7,2%).

A CF36 és CF7 sejtfal peptidoglikán elemzését a Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen (DSMZ; Braunschweig, Németország) munkatársa, N. Weiss végezte Schleifer és Kandler (12) által vázolt vékonyréteg-kromatográfiás módszerrel. A peptidoglikán B2β típusú volt, d-ornitin diaminosavval.

A DNS-DNS hibridizációt P. Schumann végezte a DSMZ-ben De Ley és munkatársai (3) által leírtak szerint, Escara és Hutton (4) és Huss és munkatársai (7) módosításával. A CF36 DNS-homológia aránya a M. luteolum LMG 16207T törzzsel csak 33,7%, a M. oxydans DSM 20578T törzzsel pedig 46,6% volt, de a CF7, CF34 és CF40 törzsekkel magas, 78,1, 81,8 és 78,2%-os DNS-rokonsági szintet kaptunk. Ez összhangban volt azzal, hogy egyetlen fajhoz sorolták őket. A CF36 törzs DNS-ének G+C-tartalma 69,9 mol% volt a DSMZ-ben meghatározottak szerint.

A hat törzs gram-pozitív, mozgékony, coryneform pálcika volt. Jól szaporodtak Columbia blood agaron 37°C-on, és a kolóniák színe sárga volt. A törzsek szigorúan aerobak, kataláz pozitívak és oxidáz negatívak voltak. Képesek voltak az eszkulin és a zselatin hidrolizálására. Bár a 16S rDNS-szekvenálás szoros rokonságot mutatott a M. luteolummal, a M. saperdae-vel és a M. liquefaciens-szel, ezek a fajok fenotípusosan teljesen különbözőek voltak. Egyikük sem nőtt 37°C-on, a M. luteolum és a M. liquefaciens nem volt mozgékony, a M. luteolum és a M. saperdae pedig nem volt proteolitikus. Ezek az eredmények összhangban vannak az irodalmi adatokkal (2). A törzsek fenotípusos tulajdonságai leginkább a M. oxydanshoz hasonlítottak. A glükózt oxidatív módon savasították alacsony peptontartalmú fenolvörös agaron (15). Az összes törzs 40 °C-on növekedett, míg a M. oxydans izolátumok egyike sem volt képes ezen a hőmérsékleten növekedni. Továbbá a M. oxydans-szal ellentétben a szalicin nem savasodott. Az új törzseket az API 50CH asszimilációs csíkok (bioMérieux) segítségével is meg lehetett különböztetni a M. oxydans-tól. A laktózt hasznosították, a 2-ketoglükonátot pedig nem, míg a M. oxydans az ellenkező reakciókat mutatta. Amikor API ZYM csíkokat (bioMérieux) használtak, az észteráz-lipáz (C8), α-kimotripszin és β-glükozidáz negatív reakciói elválasztották a hat törzset a M. oxydans-tól. Az új törzseket a rokon oxidatív, mozgékony, proteolitikus, 37°C-on növekvő Microbacterium fajoktól megkülönböztető fenotípusos jellemzőket a 22. táblázat tartalmazza.

Az antibiotikum-érzékenységet Mueller-Hinton agaron, E-test csíkokkal (PDM, Solna, Svédország) vizsgáltuk. A MIC-tartományok (mikrogramm per milliliter) a következők voltak: penicillin, 1,5-2; ampicillin, 1-1,5; cefotaxim, 3-6; cefalotin, 16-24; ciprofloxacin, 1-1,5; gentamicin, 2-3; vancomycin, 3-4; klaritromicin, <0,016.

A fenotípusos, kemotaxonómiai és genetikai vizsgálatok arra utalnak, hogy a hat vizsgált törzs a Microbacterium nemzetségbe tartozik, de egy új fajt alkot, amelyre a Microbacterium paraoxydans nevet javasoljuk, és amely szoros rokonságban áll a M. oxydans, M. saperdae, M. luteolum és M. liquefaciens fajokkal (11. ábra).).

Mindössze néhány jelentés foglalkozik Microbacterium fajok izolálásával klinikai anyagból. A legtöbbet kezdetben a CDC A-4 vagy A-5 csoportjába sorolták, és még az újabb izolátumokat is ritkán azonosították faji szinten (1, 5, 6, 9). Csak kevés esetben bizonyult az izolátum a fertőzés kórokozójának. Egy Microbacterium által okozott endophthalmitis esetről számoltak be Funke és munkatársai, és a 16S rDNS-szekvenálás alapján a törzsről úgy gondolták, hogy egy le nem írt fajhoz tartozik (6). A klinikai mintákban előforduló Microbacterium spp. vizsgálatában több törzset M. arborescens és M. imperiale néven azonosítottak, de genetikai megerősítést nem végeztek (5). Rákos betegeknél jelentették a Microbacteriummal kapcsolatos bakterémia nosocomiális kitörését, de a kórokozó szervezetet nem sikerült faji szinten azonosítani. Ebben a vizsgálatban a központi vénás katéter volt a fő kockázati tényező (1). A közelmúltban két, 16S rDNS-szekvenálással azonosított, katéterrel összefüggő Microbacterium-baktérium okozta bakterémia esetéről számoltak be. Az egyik izolátum 99,4%-ban a M. oxydanshoz, a másik 98,7%-ban a M. trichothecenolyticumhoz tartozott, de a hivatalos fajszintű azonosítás nem sikerült (9).

A CF36 törzset többhetes időközönként izolálták a beteg vértenyészeteiből, és bár az eltávolított katéterből izolált organizmust csak részben sikerült azonosítani, valószínű, hogy az ismételt bakterémia a katéterhez kapcsolódott, ami megerősíti, hogy az intravaszkuláris katéterek az ilyen organizmusok általi fertőzés kockázati tényezőjét jelentik. Eredetük lehet a beteg bőre, de mivel a mikrobaktériumok természetes élőhelye az élettelen környezet, nem zárható ki, hogy a beteg katéterét szennyezett perfúziós folyadék vetette be.

Az elmúlt évtizedek során laboratóriumunkban 30 humán eredetű mikrobaktérium izolátumot gyűjtöttünk. E törzsek mindegyikét fenotípusos és kemotaxonómiai jellemzők sorozata és 16S rDNS-szekvenálás alapján azonosítottuk. Messze a M. oxydans volt a leggyakrabban izolált faj, amely a törzsek mintegy harmadát tette ki (30-ból 9), ezt követte a M. paraoxydans (5 törzs); a M. aurumot és a M. lacticumot egyenként 4 törzs képviselte. A fennmaradó nyolc törzs több faj között szóródott el, egy M. foliorum izolátum, egy M. schleiferi izolátum, egy M. testaceum izolátum és öt olyan izolátum, amely nem tartozott egyik leírt fajhoz sem.

Noha a mikrobaktériumok ritkán vesznek részt emberi betegségekben, a nosokomiális körülmények között talált releváns izolátumok száma egyre nő. Bár több mint 30 fajt ismertek el a nemzetségben, valószínű, hogy csak korlátozott számban izoláltak közülük klinikai mintákból. A humán izolátumok pontosabb azonosítása segíthet jobban megérteni, mely fajok hajlamosak opportunista kórokozókká válni.

.