Mi az a sejtvonal?

A sejtvonal az, amikor egy bizonyos sejttípust tartósan in vitro tenyésztenek, hogy folyamatosan termeljenek sejteket, mindaddig, amíg friss táptalajjal látják el őket, amelyen növekedhetnek.

Képhitelezés: Jens Goepfert / .com

A sejtvonal különbözik a normál sejtkultúrától, mivel a sejtvonalon belüli sejteket immortalizálták. A sejtek halhatatlanná tétele az, amikor a sejtvonalon belüli sejteket olyan módon mutálják, hogy folyamatosan osztódjanak, és ne érjenek el egy bizonyos növekedési határt. Ezzel szemben az elsődleges sejtkultúrában lévő sejteket közvetlenül a szövetekből veszik, és meghatározott élettartammal rendelkeznek.

A sejtvonal előnyei az elsődleges sejtkultúrával szemben:

• Korlátlan mennyiségű sejtanyagot biztosítanak a vizsgálathoz
• Mindig azonos tisztaságú sejteket állítanak elő, így az eredmények reprodukálhatók
• Költséghatékony
• Egyszerűen karbantartható

Miért van szükségünk sejtvonalakra?

A sejtvonal felállítása rendkívül gyakori gyakorlat a sejt- és molekuláris biológiai kutatásokban. Ezeket a sejteket a sejtanyagcsere és a génműködés számos különböző területének tanulmányozására, valamint vakcinák, antitestek és bizonyos gyógyszerek előállítására lehet használni.

A különböző sejtvonalakat meghatározott célokra használják. Például a HeLa sejtvonalakat gyakran használják a rák tanulmányozására, a humán embrionális vesesejteket (HEK) gyakran használják a génexpresszió tanulmányozására, a kínai hörcsög petefészek sejteket (CHO) pedig gyakran használják géntechnológiához vagy bizonyos termékek szintéziséhez.

Mit kínálnak a riporter-jelölt sejtvonalak?

A riporter-jelölt sejtvonalak, amelyeket egyszerűen riporter-sejtvonalaknak is neveznek, a normál sejtvonalakhoz képest eltérő alkalmazásokat kínálnak. Használhatók fehérjék, transzkripciós faktorok vagy más molekulák expressziójának vizualizálására és nyomon követésére, valamint potenciálisan arra, hogy valós időben kövessék nyomon, hogy hol vannak a teljes sejteken belül. Ez lehetővé teszi a kutatók számára annak biztosítását, hogy sejtvonalaik pontosan reprezentálják a természetes szövetekben bekövetkező normális metabolikus változásokat, és ami még fontosabb, meghatározhatják, hogy mely gének fejeződnek ki aktívan egy sejtben.

Hogyan működnek a riporter-jelölt sejtvonalak?

A riporter-sejtvonalak leggyakoribb célja bizonyos gének kifejeződésének vagy bizonyos fehérjék termelésének mérése. Ez úgy történik, hogy riportergéneket visznek be egy sejtvonalba.

Változatos gének használhatók riportergénekként, és általában a mérhető aktivitás mértéke alapján választják ki őket. Például gyakran használják a luciferáz vagy a GFP (zöld fluoreszcens fehérje) génjét, mivel mindkét előállított fehérje kiváltható, hogy mérhető fluoreszcenciát produkáljon. Ezt a fluoreszcenciát luminométerrel vagy spektrofotométerrel lehet mérni.

A kiválasztott riportergént egy vektorba illesztik a vizsgált gén promótere mellé, majd a használt sejtvonalat ezzel a vektorral transzfektálják. Ha a promóter aktívan kifejeződik a sejtvonalon belül, akkor a riportergén is kifejeződik, ami mérhető.

Hogyan hasznosítható ez a rendszer?

Ez a rendszer elsősorban arra épül, hogy mérjük, hogy a specifikus promóterek kifejeződnek-e, de ez felhasználható különböző biokémiai útvonalak aktivitásának mérésére is, amelyeknek downstream jelzései a gének átírásával végződnek. Annak meghatározása, hogy bizonyos gének kifejeződnek-e, azt is meghatározhatja, hogy egy sejtvonal megfertőződött-e vírussal, vagy rák kialakulására utalhat.

Ez a rendszer tehát nagyon hasznos a különböző betegségek vizsgálatában, mivel könnyen értelmezhető eredményeket ad arra vonatkozóan, hogy különböző körülmények között hogyan fejeződnek ki a különböző gének.

További olvasmányok

• All Cell Labeling Content
• Nucleic Acid Labelling Overview
• Bioorthogonal Chemical Reporters
• Adipo-Clear
• DNS Labelling Using DAPI: Methodology

Hivatkozások