Az immunfluoreszcencia típusai

Az immunfluoreszcencia technikáknak két osztálya van, az elsődleges (vagy közvetlen) és a másodlagos (vagy közvetett).

A primer (közvetlen)

A primer, vagy közvetlen immunfluoreszcencia egyetlen ellenanyagot használ, amely kémiailag kapcsolódik egy fluorofórhoz. Az antitest felismeri a célmolekulát és kötődik hozzá, az általa hordozott fluorofór pedig mikroszkópiával kimutatható. Ennek a technikának számos előnye van az alábbi másodlagos (vagy közvetett) protokollal szemben, mivel az antitest közvetlenül kapcsolódik a fluorofórhoz. Ez csökkenti a festési eljárás lépéseinek számát, így a folyamat gyorsabbá válik, és az antitestek keresztreaktivitásával vagy nem-specifitásával kapcsolatos problémák elkerülése révén csökkentheti a háttérjelet. Mivel azonban az elsődleges antitesthez köthető fluoreszcens molekulák száma korlátozott, a közvetlen immunfluoreszcencia kevésbé érzékeny, mint az indirekt immunfluoreszcencia.

Szekunder (indirekt)

A szekunder vagy indirekt immunfluoreszcencia két antitestet használ; a nem jelölt első (elsődleges) antitest specifikusan megköti a célmolekulát, a fluorofort hordozó másodlagos antitest pedig felismeri az elsődleges antitestet és kötődik hozzá. Egy primer antitesthez több másodlagos antitest is kapcsolódhat. Ez jelerősítést biztosít azáltal, hogy növeli az egy antigénre jutó fluorofórmolekulák számát. Ez a protokoll bonyolultabb és időigényesebb, mint a fenti elsődleges (vagy közvetlen) protokoll, de nagyobb rugalmasságot tesz lehetővé, mivel egy adott elsődleges antitesthez többféle másodlagos antitest és kimutatási technika használható.