A genotoxicitás egy anyag azon képességére utal, hogy károsítja a sejtek genetikai információit (a gének szerkezetének, szekvenciájának és/vagy számának megváltozása), amelynek közvetlen vagy közvetett hatásai lehetnek, például mutációk indukciója, gének aktiválása vagy inaktiválása. A DNS-javító vagy apoptózis útvonalak általában aktiválódnak a károsodás kijavítására vagy ellenőrzésére; ha azonban a károsodás rögzül, mutagenezis és akár rák is bekövetkezhet. Sokszor a változások tartósak és öröklődnek, így mind a szomatikus sejteket, mind az ivarsejteket érinthetik, amelyek a következő generációkra öröklődnek. A definícióból egyértelmű, hogy minden mutagén genotoxicitással rendelkezik, de a genotoxikus vegyületek nem feltétlenül mutagének. A genotoxicitás hatással van a betegek, sőt a csecsemők egészségére is, ezért fontos szempont, amelyet az IND engedélyezése során figyelembe kell venni. Mi több, a genotoxicitási vizsgálatok is gyakori in vitro tesztek a rákkeltő hatás előrejelzésére. A Creative Biolabs különböző megközelítéseket fejlesztett ki a gyógyszerjelöltek genotoxicitásának becslésére, és segít az ügyfeleknek információt gyűjteni az IND engedélyezéshez.
A genotoxicitási tesztek célja annak meghatározása, hogy egy gyógyszerjelölt károsítja-e a sejtek genetikai anyagait és rákot okoz-e. Az ilyen tesztekben a vegyületnek való expozíciót követően mérik a sejtekben a DNS-károsodást (pl. pontmutációk, szálszakadás, keresztkötés, strukturális és/vagy numerikus kromoszóma-rendellenességek és a kimetszéses javítás elvesztése). Számos genotoxicitási vizsgálat végezhető baktérium-, élesztő- és emlőssejteken. Az Ames-teszt és az Escherichia coli reverz mutációs próba két, baktériumsejteken alapuló in vitro mutagenitási vizsgálati módszer, míg az emlősök kromoszóma-aberrációs tesztje és az emlőssejtek génmutációs tesztje emlőssejteken alapul. Az Ames-teszt és a Comet-teszt a két legnépszerűbb módszer, amelyet a vegyi anyagok DNS-károsító és rákkeltő potenciáljának értékelésére használnak.
Ames-teszt (bakteriális fordított mutációs próba)
Ames-teszt olyan auxotróf mutáns baktériumtörzseket alkalmaz, amelyeknek a növekedéshez hisztidinre van szükségük a környezetből. Az Ames-tesztben, ha a vizsgált anyag képes olyan mutációkat létrehozni (genotoxikus), amelyek a törzsek prototróf állapotát eredményezik, a sejteknek normális növekedést kell mutatniuk hisztidinmentes táptalajon.
1. ábra. Ames-teszt.
Comet Assay (Single Cell Gel Electrophoresis Assay)
Comet assay az egyik legelterjedtebb genotoxicitási teszt. A sejteket detergensekkel és sókkal lizálják, és a felszabaduló DNS közel semleges pH-jú körülmények között agaróz gélelektroforézisen megy keresztül. Minél több kettősszál-törést tartalmaz egy sejt, annál gyorsabban vándorol a DNS az anód felé. Ez a technika meglehetősen érzékeny a DNS-károsodás kimutatására, könnyen és olcsón elvégezhető, és gyorsan megkapjuk a vizsgálati eredményeket.
A vegyületek genotoxicitásának meghatározására egyéb in vitro és in vivo toxikológiai teszteket is használnak, mint például az egér limfóma TK+/- assay, SOS/umu assay, valamint az in vitro és in vivo mikronukleusz teszt.
A Creative Biolabs egyéb gyógyszerkutatási szolgáltatásokat is nyújt. Részletesebb információért, kérjük, lépjen kapcsolatba velünk, vagy küldjön nekünk közvetlenül egy megkeresést.
Kizárólag laboratóriumi kutatási célokra.