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As colagenases 72- e 92-kD tipo IV são membros de um grupo de metaloproteases de zinco secretadas que, nos mamíferos, degradam os colágenos da matriz extracelular. Outros membros deste grupo incluem colagenase intersticial (MMP1; 120353) e estromelysin (MMP3; 185250). A colagenase tipo IV 72-kD (MMP2, ou CLG4A; 120360) é secretada de fibroblastos cutâneos normais, enquanto a colagenase 92-kD (CLG4B) é produzida por macrófagos e granulócitos alveolares normais. A colagenase 92-kD tipo IV é também conhecida como gelatinase 92-kD, colagenase tipo V, ou metaloproteinase-9 de matriz (MMP9); veja o glossário de metaloproteinases de matriz fornecido por Nagase et al. (1992).

Both CLG4A e CLG4B têm 13 exons e localizações intron similares (Huhtala et al., 1991). Os 13 exons de ambos CLG4A e CLG4B são 3 mais do que foram encontrados em outros membros desta família genética. Os exons extras codificam os aminoácidos do domínio semelhante à fibronectina, que foi encontrado apenas nas colagenases 72- e 92-kD tipo IV.

Por hibridação para DNAs híbridos de células somáticas, Collier et al. (1991) demonstraram que ambos CLG4A e CLG4B estão situados no cromossoma 16. Entretanto, St Jean et al. (1995) atribuíram o CLG4B ao cromossomo 20. Eles fizeram o mapeamento da ligação do locus CLG4B em 10 pedigrees de referência CEPH usando um dinucleotídeo polimórfico repetido na região de flanqueamento de 5-prime do gene. St Jean et al. (1995) observaram escores de alojamento entre 10,45 e 20,29 com marcadores na região dos cromossomos 20q11,2-q13,1. Outro suporte para atribuição do CLG4B ao cromossomo 20 foi fornecido pela análise de híbridos de células somáticas humanas/rodentes. Devido às suas estruturas genéticas semelhantes, o clone CLG4B cDNA utilizado no mapeamento do cromossoma 16 pode ter sido hibridizado para o CLG4A em vez do CLG4B no cromossoma 20.

Linn et al. (1996) reatribuíram o MMP9 (referido por eles como CLG4B) ao cromossomo 20 com base em 3 diferentes linhas de evidência: triagem de um painel de mapeamento híbrido de células somáticas, hibridação in situ de fluorescência e análise de ligação usando um polimorfismo recentemente identificado. Eles também mapearam o rato Clg4b para o cromossoma 2, que não tem homologia conhecida para o cromossoma 16 humano, mas grandes regiões de homologia com o cromossoma 20 humano.

Laterveer et al. (1996) demonstraram que a interleucina-8 (IL8; 146930) induz a mobilização rápida de células progenitoras hematopoiéticas (HPCs) da medula óssea de macacos rhesus. Como a ativação de neutrófilos pela IL8 induz a liberação de MMP9, que está envolvida na degradação de moléculas de matriz extracelular, Opdenakker et al. (1998) e Pruijt et al. (1999) levantaram a hipótese de que a liberação de MMP9 poderia induzir a mobilização de células-tronco através da clivagem de moléculas de matriz às quais as células-tronco estão presas. Pruijt et al. (1999) mostraram que a mobilização de HPCs poderia ser evitada pelo pré-tratamento com um anticorpo inibitório anti-gelatinase B, indicando que a MMP9 está envolvida como um mediador da mobilização de HPCs induzida por IL8. Van den Steen et al. (2000) mostraram que a clivagem N-terminal mediada por MMP9 da IL8 potencializa a ativação dos neutrófilos pela IL8, medida pelo aumento do cálcio intracelular, secreção de MMP9 e quimiotaxia dos neutrófilos.

Yu e Stamenkovic (2000) identificaram uma relação funcional entre o receptor hialurônico CD44 (107269), MMP9, e o fator de crescimento transformador-beta (TGFB; ver 190180) no controle do remodelamento do tecido associado ao tumor. Eles mostraram que várias isoformas de CD44 expressas em células do carcinoma murino mamário fornecem receptores de acoplamento da superfície celular para MMP9 proteolítico ativo. A localização do MMP9 na superfície celular é necessária para promover a invasão e angiogênese do tumor. A expressão da superfície celular da MMP9 estimulou a formação de tubos capilares por células endoteliais microvasculares bovinas. Yu e Stamenkovic (2000) demonstraram que o MMP9 e o MMP2 fendem proteólicamente o TGFB2 latente (190220), um mecanismo necessário para ativar o TGFB. Os autores sugeriram que a ativação do TGFB pode ser parte do mecanismo pelo qual a atividade do MMP9 induz ou promove a angiogênese.

Usando ensaios de conversão de substrato, Opdenakker et al. (1991) e Gijbels et al. (1992) detectaram níveis aumentados de MMP9 no líquido sinovial de pacientes com artrite e no líquido cerebrospinal de pacientes com esclerose múltipla, respectivamente. Price et al. (2001) detectaram uma concentração significativamente maior de MMP9 por leucócito no líquido cefalorraquidiano em pacientes adultos com meningite tuberculosa do que em pacientes com meningite bacteriana ou viral. Estudos in vitro indicaram que bacilos viáveis não eram necessários para estimular a produção de MMP9. Em contraste com as mudanças na expressão da MMP9, MMP2 e inibidor tecidual de metaloproteinase-1 (TIMP1; 305370) foram constitutivamente expressos, e este último não se opôs à atividade da MMP9. A atividade elevada da MMP9 estava relacionada à inconsciência, confusão, dano neurológico focal e morte nos pacientes com meningite tuberculosa.

Usando RT-PCR, zimografia de gelatina e análise Western blot, Kanbe et al. (1999) mostraram que mastócitos humanos cultivados expressaram MMP9 mRNA após a ativação, e que sobrenadantes de cultura produziram uma proteína MMP9 92-kD com atividade gelatinolítica. Análise imunohistoquímica detectou MMP9 em mastócitos na pele humana, pulmão e tecido sinovial. Kanbe et al. (1999) concluíram que os mastócitos produzem MMP9, que pode contribuir para a degradação e absorção da matriz extracelular no processo de respostas alérgicas e não alérgicas.

Usando um anticorpo monoclonal em uma série de seções bem caracterizadas de tumores hipofisários em parafina, Turner et al. (2000) investigaram se a expressão da MMP9 desempenha um papel em permitir angiogênese e invasão por diferentes tipos de tumores hipofisários. Eles descobriram que macroprolactinomas invasivos eram significativamente mais propensos a expressar MMP9 do que macroprolactinomas não-invasivos. Os macroprolactinomas invasivos mostraram uma coloração de MMP9 de maior densidade do que tumores não invasivos e hipófise normal, ou entre prolactinomas de diferentes tamanhos. A expressão da MMP9 estava relacionada ao comportamento agressivo do tumor. Os autores concluíram que a expressão da MMP9 está presente em alguns adenomas invasivos e recorrentes da hipófise e na maioria dos carcinomas da hipófise. Enquanto os mecanismos pelos quais a expressão da MMP9 influencia a recorrência e invasividade tumoral, e sua associação com a angiogênese, permaneceram por esclarecer, estas observações sugeriram que uma estratégia terapêutica potencial futura para alguns tumores da hipófise pode ser a administração de um inibidor sintético da MMP9.

Concentrações da MMP9 estão aumentadas no líquido de lavagem broncoalveolar (BAL), expectoração, brônquios e soro de indivíduos asmáticos em comparação com indivíduos normais. Usando a análise de broncoprovocação segmentar (PAS) e ELISA de BAL de indivíduos alérgicos, Kelly et al. (2000) detectaram aumento de MMP9 48 horas após a PAS em pacientes com antigénios em comparação com pacientes com antigénios salinos. O inibidor da TIMP1 também foi aumentado em todos os sujeitos, mas a proporção de MMP9 para TIMP1 foi significativamente mais alta no grupo com problemas de antígenos. Não foram encontradas diferenças no soro. A análise imunocitoquímica demonstrou a expressão da MMP9 principalmente nos neutrófilos. Kelly et al. (2000) concluíram que o antígeno pode contribuir não apenas para a inflamação, mas também para uma eventual remodelação das vias aéreas na asma.

Osman et al. (2002) mostraram que células dendríticas maduras (DCs) produzem mais MMP9 do que as DCs imaturas, facilitando sua migração inibidora de ácido hidroxamínico através de gel in vitro e, presumivelmente, através da matriz extracelular para monitorar o ambiente antigênico in vivo. A análise RT-PCR indicou que a expressão aumentada do MMP9 está correlacionada com uma desregulamentação do TIMP1 e, particularmente, do TIMP2 (188825), enquanto a expressão do TIMP3 (188826) é upregulada. Os autores concluíram que o balanço do MMP e do TIMP determina a capacidade migratória líquida das CD. Eles propuseram que o TIMP3 pode ser um marcador para CDs maduros.

Seguindo a expressão forçada em uma linha celular de fibrossarcoma, Yan et al. (2003) descobriram que o MTA1 (603526) reprimiu a expressão do MMP9. MTA1 ligou diretamente o promotor MMP9 e a expressão reprimida através de mecanismos dependentes e independentes do histórico.

Wang et al. (2003) demonstraram que o ativador do plasminogênio tecidual (TPA; 173370) upregula o MMP9 em cultura celular e in vivo. Os níveis de MMP9 foram menores no nocaute de TPA em comparação com ratos do tipo selvagem após isquemia cerebral focal. Em células endoteliais microvasculares cerebrais humanas, a MMP9 foi upregulada quando a ATP recombinante foi adicionada. A interferência do RNA sugeriu que esta resposta foi mediada pela proteína relacionada ao receptor LDL (LRP1; 107770), que liga avidamente a TPA e possui propriedades sinalizadoras.

Em um estudo com 699 participantes do Framingham Study que não tinham histórico de insuficiência cardíaca ou infarto do miocárdio e que foram submetidos à ecocardiografia de rotina, Sundstrom et al. (2004) descobriram que níveis plasmáticos detectáveis de MMP9 estavam associados com aumento das dimensões ventriculares esquerdas e aumento da espessura da parede em homens. Sundstrom et al. (2004) sugeriram que o nível plasmático de MMP9 pode ser um marcador de degradação da matriz extracelular cardíaca, um processo envolvido no remodelamento do ventrículo esquerdo.

Usando um modelo angiogênico modificado, Ardi et al. (2007) demonstraram que neutrófilos humanos intactos, seu conteúdo granular e, especificamente, neutrófilos MMP9 tinham uma potente atividade proangiogênica na ausência do TIMP1.

Gong et al. (2008) descobriram que Plg (173350) -/- ratos mostraram migração reduzida da matriz trans-extracelular de macrófagos (ECM) e diminuição da ativação de Mmp9 após indução de peritonite. Injeção de Mmp9 ativa de migração de macrófagos resgatados em ratos Plg -/-. Migração de macrófagos e formação de aneurisma também foram reduzidos em camundongos Plg -/- induzidos a sofrer aneurisma da aorta abdominal (AAA). A administração de Mmp9 ativo para Plg -/- ratos promoveu a infiltração de macrófagos e o desenvolvimento de AAA. Gong et al. (2008) concluíram que a PLG regula a migração de macrófagos na inflamação via ativação do MMP9, que por sua vez regula a capacidade de migração de macrófagos através do ECM.

Lausch et al. (2009) sugeriram que há uma ligação funcional entre MMP13 (600108) e MMP9 na ossificação endocondral, como deficiência da função da proteína MMP9, causada por inativação direta (em doença recessiva devido à perda de função da MMP9), A ativação prejudicada (na doença recessiva devido à perda de função do MMP13), ou a degradação transcatalítica (na doença dominante causada pelo ganho de função do MMP13) parece ser um passo a jusante comum na patogênese da anadisplasia metafisária (MANDP1, 602111; MANDP2, 613073).

Anadisplasia Metafisária 2

Lausch et al. (2009) investigaram a base molecular da anadisplasia metafisária em 5 famílias. Em membros afetados de uma família paquistanesa não-consanguínea, identificaram homozigosidade para uma mutação no gene MMP9 (120361.0001); ver MANDP2 (613073). Em 3 outras famílias, identificaram mutações heterozigóticas no gene MMP13 (600108.0002 e 600108.0003); ver MANDP1 (602111). Lausch et al. (2009) descobriram que o MANDP recessivo (MANDP2) é causado pela perda de função homozigoto do MMP9, enquanto o MANDP dominante (MANDP1) é causado por mutações falsivas no pródigo do MMP13; essas mutações determinam a auto-ativação do MMP13 e a degradação intracelular tanto do MMP13 quanto do MMP9, resultando em uma dupla deficiência enzimática. Na quinta família estudada por Lausch et al. (2009), a probanda (paciente 11) era homozigoto para uma mutação missense no gene MMP13 (H213N; 600108.0004). Bonafe et al. (2014) afirmaram que embora este menino marroquino tenha sido inicialmente diagnosticado como tendo uma forma recessiva de MANDP1, ele poderia ser diagnosticado retrospectivamente com o tipo Spahr de displasia metafisária (MDST; 250400).

Foi sugerido que as metaloproteinases de matriz desempenham papéis na patogênese do enfisema pulmonar. MMP9 e MMP12 (601046) são responsáveis pela maior parte da atividade da elastase derivada de macrófagos em fumantes. Minematsu et al. (2001) estudaram a associação entre um polimorfismo funcional da MMP9, -1562C-T, e o desenvolvimento de enfisema pulmonar em 110 fumantes e 94 não fumantes no Japão. A freqüência do alelo T foi maior em 45 fumantes com enfisema distinto nas tomografias do tórax do que em 65 fumantes sem ele (0,244 vs 0,123; p = 0,02). Os resultados sugerem que o polimorfismo do MMP9 atua como um fator genético para o desenvolvimento de enfisema pulmonar induzido pelo fumo.

Ao sequenciar todos os 13 exons MMP9 e regiões de flanco em 290 pacientes asmáticos pediátricos japoneses e 638 controles japoneses saudáveis, Nakashima et al. (2006) identificaram 17 SNPs e selecionaram 5 deles para estudos de associação. Associações significativas com risco de asma atópica pediátrica foram encontradas para um SNP 2127G-T no intron 4 e um SNP não-sinônimo, 5546G-A (arg668 a gln; R668Q), no exon 12 (p de 0,0032 e 0,0016, respectivamente). O haplótipo contendo 2127T e 5546A também foi associado a atopia (p de 0,0053). O tratamento das células epiteliais brônquicas humanas normais mostrou que o poli(I:C) era o único receptor tipo Toll-like (TLR; ver 601194) agonista que melhorava a expressão da MMP9. A análise dos repórteres mostrou aumento de atividade com o promotor MMP9 -1590C-T SNP, que está em forte ligação do desequilíbrio com 2127G-T. Nakashima et al. (2006) concluíram que a MMP9 tem um papel importante na asma.

Em um estudo de associação de caso-controle envolvendo 2 coortes japonesas independentes, Hirose et al. (2008) encontraram uma associação significativa entre um SNP falso no gene MMP9 (G279R; rs17576) e uma hérnia de disco lombar (LDH; 603932). Um SNP intrônico no gene THBS2 (rs9406328; 188061.0001) também foi fortemente associado ao LDH na população japonesa e mostrou um efeito combinatório com o MMP9, com um odds ratio de 3,03 para o genótipo que era homozigoto para os alelos de suscetibilidade de ambos os SNPs.

Por disrupção orientada em células-tronco embrionárias, Vu et al. (1998) criaram ratos homozigotos com mutação nula no gene MMP9/gelatinase B. Estes ratos exibiram um padrão anormal de vascularização e ossificação da placa de crescimento esquelético. Embora condrócitos hipertróficos tenham se desenvolvido normalmente, a apoptose, vascularização e ossificação foram retardadas, resultando no alongamento progressivo da placa de crescimento para cerca de 8 vezes o normal. Após 3 semanas pós-natal, a apoptose, vascularização e ossificação aberrantes compensaram a remodelação da placa de crescimento aumentado e finalmente produziram um esqueleto axial de aparência normal. Transplante de células da medula óssea do tipo selvagem resgataram vascularização e ossificação em placas de crescimento Mmp9-nulo, indicando que esses processos são mediados por células Mmp9-expressoras de origem da medula óssea, designadas condroclastos. As placas de crescimento de camundongos Mmp9-null em cultura mostraram uma liberação retardada de um ativador angiogênico, estabelecendo um papel para essa proteinase no controle da angiogênese.

Dubois et al. (1999) geraram ratos com deficiência de Mmp9 substituindo os domínios catalítico e ligante de zinco por um gene de resistência à neomicina orientado para o antisenso. Eles determinaram que ratos jovens Mmp9 -/- eram resistentes à indução de encefalomielite auto-imune experimental (EAE). Os camundongos adultos Mmp9 -/- desenvolveram EAE, mas ao contrário dos camundongos selvagens, não apresentaram lesões necrosantes da cauda com hiperplasia do tecido osteocartilaginoso. Dubois et al. (1999) concluíram que o MMP9 está envolvido no desenvolvimento do sistema imunológico e na propensão para desenvolver doença auto-imune.

Coussens et al. (2000) relataram que ratos transgênicos sem MMP9 apresentaram redução da hiperproliferação de queratinócitos em todos os estágios neoplásicos e uma diminuição da incidência de tumores invasivos. Entretanto, aqueles carcinomas que surgiram na ausência da Mmp9 apresentaram uma maior perda de diferenciação de queratinócitos, indicativo de um tumor mais agressivo e de maior grau. A MMP9 é predominantemente expressa em neutrófilos, macrófagos e mastócitos, e não em células neoplásicas oncogênicas positivas. Ratos quiméricos expressando MMP9 apenas em células de origem hematopoiética, produzidas por transplante de medula óssea, reconstituíram as contribuições dependentes de MMP9 para a carcinogênese escamosa. Assim, células inflamatórias podem ser coconspiradoras na carcinogênese.

Gu et al. (2002) relataram ativação da Mmp9 por óxido nítrico sintetase neuronal (NOS1; 163731) em um modelo de isquemia cerebral de camundongo. A análise imunoquímica do córtex isquêmico após acidente vascular encefálico em animais selvagens mostrou que a Mmp9 ativada colocava-se com a Nos1 dentro dos neurônios. A ativação do Mmp9 ativado foi ab-rogada após acidente vascular cerebral em camundongos nulos ou em camundongos do tipo selvagem tratados com um inibidor da NOS. A análise bioquímica e espectrometria de massa revelou que a ativação da MMP9 é iniciada pela NOS1 através da nitrosilação S da cisteína coordenadora Zn(2+)dentro do sítio ativo da MMP9. A oxidação posterior causa modificação irreversível do resíduo em ácido sulfúrico ou sulfônico. Gu et al. (2002) demonstraram que a MMP9 ativada leva à morte de células neuronais. O tratamento de neurônios cerebrocorticais cultivados com MMP9 ativado com NOS1 aumentou a apoptose e o desprendimento do prato de cultura. O pré-tratamento com um inibidor de MMP bloqueou a morte das células neuronais.

MMP9, induzido nas células da medula óssea, libera ligando o Kit solúvel (KITLG; 184745), permitindo a transferência de células-tronco endoteliais e hematopoiéticas (HSCs) do nicho quiescente para o proliferativo. Heissig et al. (2002) descobriram que a ablação da medula óssea em ratos do tipo selvagem Mmp9 induziu o Sdf1 (600835), que upregulou a expressão do Mmp9 e causou o desprendimento de Kitlg e o recrutamento de Kitlg (164920) – hastes/progenitores positivos. Em ratos Mmp9 -/-, a liberação do Kitlg e da motilidade HSC foi prejudicada, resultando em falha de recuperação hematopoiética e aumento da mortalidade, enquanto o Kitlg exógeno restaurou a hematopoiese e a sobrevivência após a ablação da medula óssea. A liberação do Kitlg por Mmp9 permitiu que as células repopuladoras de medula óssea translocassem para um nicho vascular permissivo, favorecendo a diferenciação e reconstituição do pool de células-tronco/progenitoras.

Ao examinar os efeitos de um transgene Il13 (147683) em camundongos do tipo selvagem e camundongos sem Mmp9 ou Mmp12, Lanone et al. (2002) determinaram que a inflamação eosinofílica e linfocítica mediada por IL13 e a remodelação alveolar no pulmão que ocorre na asma (600807), DPOC (606963) e doença pulmonar intersticial é dependente de ambos os mecanismos MMP9 e MMP12. Os resultados indicaram que a MMP9 inibe o acúmulo de neutrófilos, mas, ao contrário da MMP12, não tem efeito sobre o acúmulo de eosinófilos, macrófagos ou linfócitos. Além disso, verificou-se que a produção induzida por IL13 de MMP2 (120360), MMP9, MMP13 (600108) e MMP14 era dependente da MMP12.

Em uma cultura de células endoteliais cerebrais murinas, Lee et al. (2003) descobriram que o beta peptídeo amilóide (APP; 104760) induziu a síntese, liberação e ativação da MMP9, resultando em aumento da degradação da matriz extracelular. No cérebro de ratos transgênicos que expressam uma mutação da APP associada ao aumento da deposição amilóide, semelhante à encontrada na angiopatia amilóide cerebral (CAA) (ver 105150), a imunoreatividade do MMP9 foi detectada em 79% dos locais de microhemorragia. Lee et al. (2003) concluíram que a expressão da MMP9 vascular, induzida pela deposição beta amilóide, pode contribuir para o desenvolvimento de hemorragia intracerebral espontânea em AAC.

Gursoy-Ozdemir et al. (2004) induziram depressão de espalhamento cortical (CSD) em ratos e camundongos do tipo selvagem e em camundongos Mmp9 nulos. Nos animais do tipo selvagem, eles encontraram níveis aumentados de Mmp9 dentro de 3 a 6 horas no córtex ipsilateral ao CDS. Atividade gelatinolítica e vazamento de proteína plasmática foram detectados 30 minutos e 3 horas após o CDS, respectivamente; ambos foram suprimidos por injeção de um inibidor de metaloprotease. O vazamento de proteína não foi detectado em camundongos Mmp9 nulos. Gursoy-Ozdemir et al. (2004) concluíram que a despolarização neuronal e glial intensa inicia uma cascata que rompe a barreira hemato-encefálica através de um mecanismo dependente de MMP9.

Usando artérias de resistência mesentérica do tipo selvagem e ratos Mmp9 -/-, Su et al. (2006) descobriram que a inibição da Mmp2/Mmp9 diminuiu significativamente o tônus miogênico no tipo selvagem, mas não nos ratos Mmp9 -/-. A expressão Enos (NOS3; 163729) também aumentou em camundongos do tipo Mmp9 -/-. A inibição farmacológica do Enos diminuiu significativamente a resposta do endotélio ao cisalhamento, o que foi mais pronunciado nas artérias de resistência Mmp9 -/-. Su et al. (2006) concluíram que a MMP9 tem um efeito seletivo na função endotelial.

Em tecido aórtico aneurismático de Fbn1 (134797)- ratos deficientes, um modelo da síndrome de Marfan (154700), Chung et al. (2007) encontraram upregulação de Mmp2 e Mmp9, acompanhada de grave fragmentação e degradação das fibras elásticas. A força contrátil em resposta à despolarização ou estimulação do receptor foi 50 a 80% menor na aorta torácica aneurismática em comparação aos controles, mas a expressão da actina muscular alfa lisa (ACTC1; 102540) na aorta de Marfan e de ratos do tipo selvagem não foi significativamente diferente. Chung et al. (2007) concluíram que MMP2 e MMP9 são upregulados durante a formação do aneurisma da aorta torácica na síndrome de Marfan, e que a degeneração da fibra elástica resultante com deterioração da contração aórtica e das propriedades mecânicas pode explicar a patogênese do aneurisma da aorta torácica.

Num modelo de rato de dor neuropática crónica induzida por ligação da medula espinal, Kawasaki et al. (2008) encontraram um aumento rápido e transitório da expressão de Mmp9 nos neurónios sensoriais primários do gânglio radicular dorsal lesionados. A Upregulação da Mmp2 mostrou um atraso na resposta das células do satélite do gânglio radicular dorsal e astrocídeos espinhais. A inibição local da Mmp9 inibiu a fase inicial da dor neuropática e a inibição da Mmp2 suprimiu a fase posterior da dor neuropática. A administração intratérmica de Mmp9 ou Mmp2 produziu sintomas de dor. A Mmp9-null mice não apresentou alodinia mecânica na fase inicial, mas a dor desenvolveu-se no 10º dia. Outros estudos indicaram que a dor estava associada com Mmp9 e Mmp2 clivagem de IL1B (147720), assim como ativação de microglia e astrocitos. Os achados indicaram um mecanismo temporal para dor neuropática.

Volkman et al. (2010) observaram que micobactérias direcionam a formação de granuloma precoce através de sua região de diferença-1 (RD1) locus que codifica o sistema de secreção-1 Esat6 (Esx1), que consiste de pelo menos 10 genes, incluindo Esat6. Usando zebrafish infectado com Mycobacterium marinum como modelo de formação de granuloma tuberculoso, Volkman et al. (2010) mostraram que a proteína 6-kD Esat6 induziu a produção de Mmp9 por células epiteliais vizinhas a macrófagos infectados, como demonstrado por microscopia confocal. A Mmp9 melhora o recrutamento de macrófagos que formam um granuloma precoce, que ao invés de reduzir a infecção, permite a expansão inicial do número de bactérias. A Mycobacterium marinum sem o locus RD1 não conseguiu induzir Mmp9 e granulomas. A eliminação transitória da expressão da Mmp9 em zebrafish reduziu a formação do granuloma e a carga bacteriana. A injeção de Esat6 em peixes sem macrófagos também resultou na produção de célula epitelial Mmp9 de forma independente de Tnf 191160- e Myd88 602170. Volkman et al. (2010) propuseram que a interceptação de MMP9 pode ser amplamente útil no tratamento de uma variedade de condições inflamatórias e tuberculose. Agarwal e Bishai (2010) observaram que o alvo Esat6 poderia ser uma estratégia antivirulência análoga à terapia antitoxínica e que a inibição do MMP9, como o tratamento com corticosteróides de meningite tuberculosa (ver Price et al. (2001)) poderia aumentar o tratamento antibiótico.