Biomolecular interactions are fundamental to the vast majority of cellular processes, and identification of the major interactiveing components is usually the first step towards an understanding of the mechanisms that govern various cell functions. Assim, análises estatísticas de imagens que podem ser realizadas em imagens de microscopia de fluorescência de células fixas ou vivas têm sido rotineiramente aplicadas para estudos biofísicos e biológicos celulares. Estas abordagens medem a fração de partículas em interação através da análise de imagens de fluorescência de dupla cor para pixels colocalizados. Os algoritmos de colonização provaram ser eficazes, embora o alcance dinâmico e a precisão destas medições nunca tenham sido bem estabelecidos. A espectroscopia de correlação cruzada de imagens espaciais (ICCS), que corrige as flutuações de intensidade espacial registradas em imagens de dois canais de detecção simultaneamente, também demonstrou recentemente ser uma medida eficaz de colocalização. Através de simulações, imagens de anticorpos fluorescentes adsorvidos em vidro e medições celulares, mostramos que o ICCS tem um desempenho muito melhor que os algoritmos de colocalização padrão em densidades moderadas a altas de partículas, que são frequentemente encontradas em sistemas celulares. Além disso, verificou-se que a relação de densidade entre as duas espécies rotuladas de interesse desempenha um papel importante na precisão da análise de colocalização. Aplicando uma comparação direta e sistemática entre o padrão, o algoritmo de colocalização por microscopia de fluorescência e o ICCS espacial, mostramos regimes onde cada abordagem é aplicável e, mais importante ainda, onde eles não produzem resultados precisos.